Per fare un inserzione:
hai una situazione tipo
5'-----------X---------------3'
e vuoi inserire un tratto di DNA dove c'e' la X
Usi 2 coppie di primers fatte cosi:
--->
5'------------X------------3'
<--X
AAABBB
BBBCCC
X-->
5'------------X------------3'
<---
(nota, nel mio disegno lettere uguali sono complementari, cioe' BBB sara' complementare a BBB, ovviamente nella realta' avrai tipo CGTTGC e GCAACG)
Amplificando otterrai (fai 2 PCR separate con i 2 primers):
5'------------X
------------XAAABBB
e, dall'altra coppia
BBBCCCX-------------
X------------3'
Ora mischi il tutto e avrai qualcosa tipo
-----------X BBBCCCX-----------
-----------XAAABBB X-----------
Fai un primo passaggio denaturando e aggiungendo Taq
BBBCCCX--------
--------XAAABBB
I due filamenti saranno completati e ti daranno
--------XAAABBBCCCX--------
--------XAAABBBCCCX--------
Puoi poi amplificare il tutto con dei primer x il 5' e il 3'.
---
Per la delezione la cosa e' molto simile:
Parti da
--------XXXXXXXXX----------
--------XXXXXXXXX----------
(X e' la parte che vuoi eliminare)
Usi primer con code complementari
->
--------XXXXXXXXX----------
--------XXXXXXXXX----------
<--
AAA
e
AAA
-->
--------XXXXXXXXX----------
--------XXXXXXXXX----------
<-
Otterrai
-------AAA
-------AAA
e
AAA-------
AAA-------
Procedi poi come sopra!
Didattica
Inserito il - 15 febbraio 2006 : 17:55:16
devo eseguire degli esercizi della 
