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Discussione |
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singleguy
Nuovo Arrivato
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Cesena
5 Messaggi |
 Inserito il - 02 settembre 2005 : 12:02:58
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Buongiorno a tutti,
mi presento: sono Gianfranco e sono da poco iscritto a questo forum. A breve dovrò iniziare un progetto di ricerca che ha come scopo lo studio sugli OGM. Per ora mi sono limitato semplicemente alla determinazione della sequenza modificata del gene mediante PCR e mediante l'ausilio dei kit che normalmente si trovano in commercio. Il mio lavoro però vuole andare oltre ad esempio, lo studio della proteina che si origina dal gene modificato e la comparazione con quella...diciamo "normalmente espressa". Studi all' NMR sulla struttura ecc. Volevo chiedervi dei consigli a livello pratico e un piccolo aiuto. Non sono un genio in materia, anche perchè la mia facoltà (laurea in scienze e tecnologie alimentari) non mi ha preparato in maniera esaustiva, quindi ogni vostro consiglio sarà gradito ed apprezzato. Grazie
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A presto, Già |
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Elisabetta
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
 Inserito il - 02 settembre 2005 : 20:24:37
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Ciao,
ben arrivato, anche io sono piuttosto nuova di questo sito.
Dunque, per aiutarti mi servirebbe sapere qualcosa di più. Ad esempio, hai un anticorpo che riconosca la mutata e la wild-type? Potresti usarlo con la tecnica del Westen Blot per vedere il livello di espressione della proteina. Oppure fare una Real-time PCR per vedere se i due trascritti si esprimono allo stesso modo...
Per ora questi due suggerimenti, poi se vuoi fare qualcosa di più ambizione potresti far esprimere le proteine di tuo interesse in E. Coli e purificarle.
Non so se ti sono stata di aiuto, lo spero.
Elisabetta |
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legolas
Utente
Prov.: Lecce
Città: Trepuzzi
723 Messaggi |
Inserito il - 03 settembre 2005 : 09:37:47
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| ciao, io sono prossimo alla laurea in scienze biologiche agroalimentari e volevo suggerirti di tenerci al corrente sui risultati delle tue ricerche, su cosa si basano specificatamente? |
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singleguy
Nuovo Arrivato
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Cesena
5 Messaggi |
 Inserito il - 05 settembre 2005 : 16:01:08
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Ciao a tutti,
dunque...per quanto riguarda l'espressione in E.Coli è una procedura che ho già adottato per la sintesi della proteina CLSP (oggetto della mia tesi). Clonaggio, espressione e purificazione sono quindi tecniche che certamente utilizzerò, soprattutto per avere un confronto tra proteina espressa normalmente e proteina espressa da OGM. Non ho mai adottato il sistema con il riconoscimento attraverso anticorpi o il sistema ELISA e per quanto riguarda la PCR real time, non ho a disposizione l'apparecchiatura. Non conosco la Westen Blot. Scusate se apparentemente possa sembrare un tantino ignorante, ma sono nuovo nel campo. Sono però felice di poter condividere tutto ciò che ho imparato durante la preparazione della tesi: tecniche di clonazione e di espressione di proteine.
Il progetto sugli OGM inizierà a Novembre e sarei lieto se poteste consigliarmi anche dei testi dove apprendere meglio le tecniche di laboratorio.
Ciao a tutti....siete fantastici |
A presto, Già |
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Fil23
Utente Junior
Prov.: estero
Città: London
238 Messaggi |
Inserito il - 05 settembre 2005 : 17:19:39
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Ciao!
Se hai la possibilità di andare in qualche biblioteca prendi "Il DNA ricombinante" di Watson...la teoria delle tecniche(clonazione, purificazione, blotting) è spiegata abastanza bene!
Puoi fare per esempio un pò di saggi di caratterizzazione proteica...fondamentalmente elettroforesi bidimensionale. Puoi fare saggi per vedere come cambiano gli effetti al variare dell'espressione genica...ingegnerizzando il gene con promotori più forti o più deboli. Saggi di vitalità cellulare...al variare della concentrazione del gene wild-type e del gene OGM cambia la curva di vitalità cellulare?
Se hai bisogno di consigli sull'NMR chiedimi pure...mi sto specializzando in strutturistica. Per iniziare quanto è grande la tua proteina?...se è piccola....tipo sotto i 50 a.a. non ci son problemi a risolvere la struttura....se si sale inizia ad essere difficoltosa....sopra i 150 è impossibile praticamente usare l'NMR e devi ricorrere a cristallografia...e telo sconsiglio caldamente!
Spero di eserti stato d'aiuto!
ciao ciao   |
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ciobeddu
Nuovo Arrivato
Prov.: Rovigo
Città: Rovigo
2 Messaggi |
Inserito il - 11 settembre 2005 : 23:56:59
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ciao.. un saluto a tutti gli utenti.
io sono del parere che prima di sputarti in faccia mille tecniche di analisi è meglio sapere che cosa vuoi vedere di questa proteina. prima di questo poi devo ancora ben capire il tuo lavoro. Dici che:"mi sono limitato semplicemente alla determinazione della sequenza modificata del gene mediante PCR "
wow... cioè tu hai individuato un transgene (non conosciuto)e lo hai sequenziato? I miei complimenti poi ci dirai anche come hai fatto penso siano tutti curiosi come me...
tornando alla proteinae parlando di ogm mi viene spontanea l'associazione = cibo. quindi sta benedetta proteina mutata se puoi purificarla (di sistemi te ne hanno suggeriti un po) potresti vedere in vivo se ha effetti sulle cavie. che penso sia l'unica cosa utile visto che a mio modo di vedere sapere la struttura di una proteina non ci dice se mangiando un ogm questa faccia male o meno.. però dipende sempre da che parte punta la tua ricerca e spero in una risposta super esaustiva..  |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 19 settembre 2005 : 13:46:12
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un OGM con transgene sconosciuto? BOH, forse ho perso qualke step.
Andare direttamente in vivo mi sembra prematuro&inutile senza dati molecolari. Sia dal punto di vista scientifico che etico; e non ultimo di costo. |
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singleguy
Nuovo Arrivato
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Cesena
5 Messaggi |
Inserito il - 20 settembre 2005 : 11:49:38
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Ciao,
volevo chiedere scusa a tutti voi del forum se quello che scrivo possa essere in un certo senso frainteso o comunque scarsamente comprensibile. Come ho già specificato, non sono un biotecnologo, ma semplicemente un tecnologo alimentare che da poco si è avvicinato al mondo delle biotecnologie.
Vorrei precisare che non ho mai individuato un transgene sconosciuto e sequenziato, ma semplicemente ho verificato l'eventuale presenza di un transgene noto in una matrice alimentare commercializzata come OGM free, attraverso l'ausilio dei kit reperibili sul mercato.
Solo a partire da Novembre inizierò il mio progetto di ricerca che ha come obiettivo lo studio di OGM, in modo particolare lo studio delle proteine derivanti dai transgeni.
Continuo a chiedere il vostro aiuto, la vostra collaborazione (intesa come consigli tecnici e non), consigli su testi, dispense ecc, la vostra pazienza per la mia limitata conoscenza in materia e il vostro sostegno morale.
Grazie di cuore a tutti |
A presto, Già |
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massimiliano
Nuovo Arrivato
Città: roma
8 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2005 : 19:01:54
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| Secono le direttive europee non solo la rintracciabilità puo' costituire frode ma anche la quantità del transgene riscontrato pertanto è d'obbligo l'uso di pcr real time (ora non so bene ma mi sembra che al di sotto di una certa quantita di rivelazione del trangene è consentito, non mi chiedere il perche' a me sembra illogico se il transgene e' presente si tratta di OGM , forse ho pensato che poiche' e' stata scientificamente provata la persistenza del transgene nel suolo complessato ad argille si può ritenere che una quantita' possa essere comunque rilevabile nonostante si stia parlando di ogm free, ti posso comunque assicurare che lavorando nel settore delle biotecnologie molecolari nel settore ecologico esiste un pressapochismo da parte di molti sedicenti ricercatori che si improvvisano biologi molecolari , pur non avendone le basi culturali specialmente in molti istituti di Roma, pertanto ogni consiglio vaglialo con dovuta cautela, Ciao. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2005 : 22:06:36
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| O anche perche' sotto una certa quantita' io andrei cauto a dire che il gene e' li'... anche se usi la PCR real-time puoi sempre avere amplificazione non specifica soprattutto dopo molti cicli. |
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