Real-time PCR, DNA grumoso e TE Buffer

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marok
Utente Junior

150 Messaggi

Inserito il - 08 ottobre 2008 : 11:08:06

Salve. Ho un problemino nella real-time PCR.
Il problema � che forse il DNA estratto (e risospeso in acqua) non si risospende in modo omogeneo, in quanto i replicati non mi escono molto bene (ma tollerabile), ma i problemi maggiori emergono in sede di diluizione dove veramente ognuno va per i fatti suoi (impensabile quindi farci una curva di calibrazione con le diluizioni)ed impensabile anche valutare eventuali inibizioni (che non dovrebbero esserci per�).
La domanda che pongo � la seguente: avrei qualche vantaggio nel risospendere in TE buffer (tris-HCl 10mM, EDTA 1mM pH 8)?
Nel senso che il DNA si risospenderebbe meglio che nell'acqua?
Mi sembra anche altina la concentrazione di EDTA ed ho paura che mi inibisca la reazione, io la porterei a 0,1mM. Qualcuno a esperienza con il TE buffer?
Grazie in anticipo!