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ameliap
Nuovo Arrivato
32 Messaggi |
 Inserito il - 13 ottobre 2008 : 19:28:23
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ciao, dovrei quantificare il DNA allo spettrofotometro (purtroppo niente nanodrop, ma quanto costa?!) e non so che diluizione usare, mi aspetto una concentrazione di 30 nanogrammi microlitro, pensavo di mettere 1 microlitro di DNA e 999 di acqua, č forse trppo alta, che mi consigliate? č forse pių accurata 1 microlitro di DNA e 99 di acqua?
e quanto sono poi affidabili le letture? a me in passato ogni volta č capitato di leggerle in triplo e non sono mai uguali, uffa!
grazie a tutti
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lā
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2008 : 22:17:27
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ciao! io uso cuvette di quarzo in cui metto 300 ul di acqua distillata e poi 5 ul del DNA da quantificare. Lo spettrofotometro chiede di inserire il fattore di diluizione (che č 60 se metti 5 ul di DNA, e poi quantifichi.
Di solito ho delle letture abbastanza attendibili. |
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marok
Utente Junior
150 Messaggi |
Inserito il - 14 ottobre 2008 : 17:14:28
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| Per 30 ng/ul (che sono abbastanza pochi) con diluizione 1:1000 credo che sia un pō troppo. Per quantitā cosė piccole ti consiglio 1:100. Lo spettrofotometro ha solo lo scopo di darti un'idea della quantitā non ti dirā mai esattamente quanto ce nč, anche perchč devi valutare i rappori 260/280 e 260/230 che ti indicano quanto č puro il tuo DNA. Per il fatto che ottieni misure sempre diverse, devi spipettare a fondo lo stock di partenza prima di prendere l'aliquota e poi devi spipettare molto anche all'interno della cuvetta; quando vedi che l'assorbanza non tende pių a calare o aumentare (anche senza spipettare, fai 3 misurazione ad intervalli di 10 secondi), la soluzione č omogenea. |
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ameliap
Nuovo Arrivato
32 Messaggi |
Inserito il - 14 ottobre 2008 : 18:51:47
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| grazie mille! |
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Anyra
Utente Junior
Prov.: Pesaro-Urbino
Cittā: Saltara
212 Messaggi |
Inserito il - 15 ottobre 2008 : 12:42:38
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Considera sempre che a 280 50 microgrammi leggono 1 OD, 5 microgrammi sono 0.1 e 2.5 microgrammi leggono 0.05; pesonalmente penso che sei abbastanza al limite di acuratezza dello strumento, č uno spettrofotometro appunto.
Prova al limite a quantizzare su gel. |
Il mio Cavaliere
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quantificazione DNA
Didattica
