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mo-lab
Utente Junior

Città: utrecht


348 Messaggi
Inserito il - 04 novembre 2008 : 17:15:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mo-lab Invia a mo-lab un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti,
secondo voi congelando a meno 20 una mix di pcr senza dna corro rischio di rovinare la taq fino al punto da nn farla funzionare piu?
attendo pareri!
grazie

marok
Utente Junior



150 Messaggi
Inserito il - 04 novembre 2008 : 17:29:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di marok Invia a marok un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Dipende per quanto tempo. E' hot start la taq? Io l' ho fatto una volta, riutilizzandola 4 giorni dopo e l'analisi non è venuta malissimo facendo una real time (ma la differenza già si notava), ma se devi fare una pcr qualitativa (e non devi amplificare DNA poco rappresentato) direi che hai molto + tempo.
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 04 novembre 2008 : 18:13:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
mah, io la taq la metto sempre all'ultimo fresca
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mo-lab
Utente Junior

Città: utrecht


348 Messaggi
Inserito il - 04 novembre 2008 : 18:20:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mo-lab Invia a mo-lab un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si per gli altri exon la metto fresca solo per uno mi sn "scordata " e lho messa prima.. le pcr le devo usare in dhplc, la taq è hot start e le ho congelate 1ora fa..ma nn credo ke il tempo influisca..o un ora o 20gg sempre congelata resta
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 04 novembre 2008 : 19:57:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
No non succede niente, la Taq tanto che sia hot start o no se ne sta li bella congelata!
Io l'ho fatto alcune volte di preparare più mix e tenerla congelata.
Comunque pensa che esistono kit che contengono la mix di PCR già bella e pronta con dentro anche la Taq, se non funzionassero non li venderebbero certo!
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marok
Utente Junior



150 Messaggi
Inserito il - 06 novembre 2008 : 13:30:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di marok Invia a marok un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ma in quel caso la mix è da conservare in frigo, perchè il ciclo di congelamento, ovvero i cristalli di ghiaccio, scassano un pò la taq (è anche per questo che sta in glicerolo).
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 06 novembre 2008 : 14:45:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da marok

Ma in quel caso la mix è da conservare in frigo...

Non necessariamente!
Se provi a fare una ricerca delle varie mix con taq, vedrai che vengono tenute a -20° e in genere c'è scritto "possono" essere conservate a 2–8°C.
Da una ricerca in google ho trovato queste:
http://www1.qiagen.com/Products/Pcr/TaqSystem/TaqPcrMasterMix.aspx?ShowInfo=1
http://www.dundeecellproducts.com/products/abnova/details/D0015/2-x-Taq-PCR-Mix-with-MgCl-sub-2-sub
http://catalog.takara-bio.co.jp/en/product/basic_info.asp?unitid=U100005354
http://www.abnova.com/products/products_detail.asp?Catalog_id=D0015&PageID=6&Print=Y&Print1=Y1

sono solo le prime che mi sono venute fuori dalla ricerca, non le ho mai utilizzate (a parte una), ma come potrai vedere dicono di tenerle a -20°C. Poi sicuramente ce ne saranno altre che dicono di tenerle in frigo, ma non è una regola!

In ogni caso la domanda era per una mix a cui era stata aggiunta la Taq e congelata una volta, non credo debba subire prolungati cicli di congelamento/scongelamento.

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marok
Utente Junior



150 Messaggi
Inserito il - 06 novembre 2008 : 16:49:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di marok Invia a marok un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
wow non ho mai usato una master da tenere in congelatore...devo assolutamente provarle
THX
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