librerie sottrattive

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Chimere, cloni e geni
Nicole Le Douarin

La sesta estinzione. La vita sulla Terra e il futuro del genere umano
Richard Leakey, Roger Lewin

Post-human. Verso nuovi modelli di esistenza
Roberto Marchesini

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Biologia Molecolare

librerie sottrattive

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Biologia Molecolare:

Didattica

Blog Inside the Cell

Protocolli

Siti di Biologia Molecolare e Tecniche

Quiz

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

darkene
Utente Junior

291 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2006 : 12:33:21

ho bisogno di notizie sulla costruzione di librerie sottrattive per l'analisi differenziale dell'espressione genica.
grazie

Luis 22
Utente

Citt�: Bari

755 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2006 : 20:13:39

IBRIDAZIONE SOTTRATTIVA

Generazione di una genoteca nella quale siano state eliminate le sequenze in comune tra i due tipi cellulari: genoteca sottrattiva di cDNA.

Obiettivo: isolamento di cDNA particolarmente rari.
Identificazione di di trascritti che sono presenti in un campione (chiamato tester), ma che sono assenti in un altro campione (chiamato driver). Esempio: il driver deriva da cellule di un individuo malato di cui si vogliono identificare i geni che non vengono espressi, il driver deriva da cellule normali.

-Estrazione RNA poli(a)+ da entrambi i campioni (tester e driver) e produzione di cDNA da entrambi mediante retrotrascrizione.

-marcatura del cDNA driver (in cui sono assenti alcuni trascritti) mediante biotina. La biotina ha una elevata affinit� per la streptavidina, per cui tutte le molecole che contengono biotina possono essere facilmente rimosse.

-mescolamento di un largo eccesso di cDNA driver marcati con i cDNA tester. Tale miscela viene sottoposta a denaturazione e successiva rinaturazione.

-ibridizzano: driver-driver e ibridi driver-tester tra i trascritti presenti in entrambi i campioni. Poich� i filamenti derivanti da cDNA driver contengono la biotina possono essere facilmente rimossi utilizzando la straptavidina. I cDNA derivanti da trascritti presenti solo nel tester ed assenti nel driver non troveranno molecole complementari con cui ibridarsi.
I cDNA del tester che non si sono ibridati con cDNA driver perch� il corrispondente gene non � espresso nella popolazione driver, e che quindi non sono stati sottratti alla popolazione di molecole, vengono utilizzati per produrre una library sottrattiva di cDNA mediante l�aggiunta di adattatori e la ligazione in un vettore.

La genoteca sottrattiva viene sottoposta a screening differenziale utilizzando sonde provenienti da differenti tipi cellulari.

Svantaggi: richiede una quantit� abbastanza elevata di mRNA.

PS= se vuoi posso anche fornirti una immagine molto chiara.

La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine � vivere, sfogliarli a caso � sognare. (Arthur Schopenhauer)&