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Ignacio Celestino
Nuovo Arrivato

9 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 14:28:50

Salve a tutti

:

Sto mettendo appunto una real time relativa per studiare l'espressione di proteine virali in cellule infette. Uso SYBR GREEN. Ora mi sono disegnato i primer con un programma, mi hanno consigliato di testarli visto che sono nuovi.

Ora per vedere se il mio sistema è efficiente: La prima volta è più opportuno usare diverse concentrazioni dei primer tipo 100uM, 50uM e 25uM oppure mantenere la loro concentrazione costante e magari diluire il campione???

Grazie mille e buon lavoro!!!!

GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 15:00:08

Beh per testare i primers io proverei diverse concentrazioni di primers, magari con due o tre diluizioni di un campione (sempre lo stesso).
Però che concentrazioni hai scritto???

Intendevi nM (nano molare)?
Perchè 100uM è tantissimo! E' la soluzione madre che fai quando scogli i primers!
In genere la concentrazione di primers che si usa in una PCR è 100-500nM (= 0.1-0.5uM)

Ignacio Celestino
Nuovo Arrivato

9 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 16:06:48

Grazie della risposta, per quanto riguarda la concentrazione dei primer hai ragione mi sono sbagliato parto da 400nM!!!

Domani mattina ci provo allora...vediamo che cosa ne viene fuori

Ciaooo e grazie ancora GFPina.