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silvietta82
Utente Junior
126 Messaggi |
 Inserito il - 19 novembre 2008 : 23:31:02
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Ciao qualcuno sa spiegarmi come funziona questo test? Io ho capito che fornisco il substrato e ATP marcato con P32 e se la chinasi è attiva ilsuo substrato verrà marcato con la radioattività...ma mi manca qualche passaggio..nell'esemipio che sto studiando si trasfettano le COS con la chinasi (chinasi-flag) che voglio testare...non capisco come da qui si arriva poi al blot...aiutooo!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 19 novembre 2008 : 23:49:52
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Allora, se tu metti ATP radioattivo, quando la chinasi fosforila la proteina userà l'ATP radioattivo e quindi il substrato diventerà radioattivo.
Dopo aver lasciato agire la kinasi vai a recuperare il tuo substrato e a valutarne la radioattività. Questo è un indice indiretto dell'attività della kinasi, perchè più la kinasi è attiva più il substrato diventerà radioattivo. |
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silvietta82
Utente Junior
126 Messaggi |
Inserito il - 20 novembre 2008 : 14:13:02
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| Ok, quindi per recuperare il substrato immunoprecipito con Ab contro il substrato, faccio corsa su gel, western blot e autoradiografia? Grazie mille già per il precedente aiuto! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 20 novembre 2008 : 15:38:42
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| Sì, quello è un modo. Ovviamente potresti anche farlo in altri modi, chessò, tramite cromatografia, oppure semplicemente fare un estratto proteico e fare un western blot, insomma dipende dai casi. |
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