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HEK
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 29 novembre 2008 : 14:08:03
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ciao a tutti!!! mi servirebbero sapere delle informazioni su come trasfettare cellule di HEK 293....
ho fatto varie prove utilizzando la trasfettina (cioè liposomi...ma le cellule stanno sempre male...
sul datasheet mi dice di utilizzarne 40 microlitri ma non va ben per niente....
qualcuno mi saprebbe dire di più? grazie
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 29 novembre 2008 : 20:04:06
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Le 293 si trasfettano molto bene, anche con il calcio cloruro. Oppure bastano pochi ul di Lipofectamine (10-15...ora non ricordo preciso).
Se non riesci a trasfettarle...non so...
mi viene da pensare che andrebbero cambiate le cellule perchè sono invecchiate, oppure possono essere contaminate da micoplasma... |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
Inserito il - 30 novembre 2008 : 08:36:36
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Io trasfettavo le HEK in piastre da 10 (800000 cells/dish) così:
-50 microL di CaCl2 2.5M
-15 gamma di DNA plasmidico
-H2O sterile a un volume finale di 500 microL
Poi aggiungi ai complessi Ca/Dna a 500 microL di tampone HeBs 2X pH 7.05
Dopo 30' RT trasfetti e poi cambi il terreno dopo 5-6 ore
A me così si trasfettavano molto bene, l'unico consiglio che ti do è stai attento al passaggio in piastra delle cellule perchè dopo una 15 di passaggi cominciano a dare rogne. Ciao |
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Trasfezione HEK 293
Didattica e Relazioni
