separazione citosol-mitocondri

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maril�82
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2008 : 12:39:51

ciao ragazzi, ho un problema...devo eseguire una separazione della frazione citosolica e mitocondriale da cellule tumorali per vedere, mediante WB,se in seguito al trattamento con un farmaco che induce apoptosi ho rilascio di citocromo c dai mitocondri. Ho provato gi� due protocolli ma la separazione � molto sporca...cio� mi ritrovo il citocromo c nel citosol del controllo!!!! Avete un protocollo da suggerirmi?...grazie mille

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2008 : 13:29:10

Forse sarebbe utile sapere che protocolli hai gi� provato!

Comunque puoi provare questo:
http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11411
(tradotto qui)
http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=40

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Michy981
Nuovo Arrivato

6 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2008 : 23:37:25

Ciao Blog.Ma tu sei obbligata a vallutare i mitocondri in via diretta o indiretta? Mi spiego: se la tecnica non ti riesce "pulita" per motivi ovvi, non puoi testare quelche targets dell'azione del citocromo c in seguito all'attivazione della pathway apoptotica, per esempio qualche caspasi?