ciao a tutti! la marcatura enzimatica come consente la rivelazione? è necessaria la presenza di un substrato nel mezzo di reazione che si trasforma in un prodotto colorato o fluorescente? quando mi viene detto (x es) che la fosfatasi alcalina catalizza l'eliminazione di un gruppo fosfato la rivelazione come si fa? e con la perossidasi che succede? mi fate capire?
e la differenza con gli immunodosaggi amplificati che usano la fosfatasi alcalina dove sta?
mamma mia qst biochimica applicata... troppe cose e nessun concetto che viene approfondito.. a volte mi sembra di fare libera interpretazione !
si, hai qualcosa che fa fluorescenza o colore. Ad es. esistono substrati che vanno da giallo a rosso (o qualcosa di simile) x la fosfatasi alcalina e per la perossidasi ci sono composti che emettono fluorescenza.
Purtroppo al momento non mi ricordo i nomi dei substrati se vuoi posso cercare.
Eccoti un paio di copia-incolla da mie vecchie relazioni in cui c'era la fosfatasi alcalina.
Citazione: La fosfatasi alcalina è un enzima che catalizza l’idrolisi di monoesteri del fosfato nella seguente reazione: R-O-PO3H- + H2O -> R-OH + H2PO4- Le fosfatasi alcaline sono le fosfato idrolasi che hanno attività massima ad un pH relativamente alto (> 7.0). L’attività della fosfatasi alcalina viene determinata con un metodo spettrofotometrico in continuo. Il migliore substrato è il 4-nitrofenilfosfato, che è un substrato artificiale e cromogenico e in vitro viene idrolizzato dalla fosfatasi alcalina a 4-nitrofenolo, un composto che in ambiente alcalino sviluppa una colorazione gialla. Ciò consente di seguire l’attività enzimatica, registrando la comparsa del 4-nitrofenolo liberato nell’unità di tempo alla lunghezza d’onda di 400nm.
Con la perossidasi invece c'è un substrato chemioluminescente.
...e vicinissimo al mio sapere si accampa la tenebra della mia ignoranza...