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Kiola
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
 Inserito il - 21 gennaio 2009 : 12:19:42
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qualcuno mi aiua desrivendomi la procedura dell'immunoprecipitazione della cromatina???
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6941 Messaggi |
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Kiola
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 12:36:16
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dai dai...
và benissimo la cosa sommaaria!!!
grazie giuliano
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Kiola
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 12:40:15
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ho cidto il tuo profilo giuliano e ho letto che sei alla ricerca di lavoro!!!
è davvero cosi difficile come si dice???
io sto frequentando il primo anna della fspecialistica in scienze fisiopatologiche (una specialistica di biologia) a pisa e mi sento già disoccupata!!!
=(
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6941 Messaggi |
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 12:52:07
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La ChIP è una tecnica che permette di vedere l'effettivo legame di proteine al DNA, permettendo di tenere i tempi. Ad esempio è utile se si vuole sapere, dopo una stimolazione, se una data proteina è legata al DNA dopo due ore, dopo quattro, dopo sei, dopo otto...
Quindi prima di tutto si fanno le varie colture cellulari che saranno stimolate tutte contemporaneamente, ma che verranno analizzate a tempi diversi.
Per prima cosa si fissano le cellule in formaldeide, in modo da poter "congelare" la situazione a quell'ora (punto: in genere si parla di punto uno, punto due eccetera, quando si fa una cinetica). In questo modo siamo sicuri che le proteine legate al DNA non si staccheranno finché non lo vogliamo noi. Si lisano le cellule con un blando detergente per non rompere i nuclei: questi verranno sonicati (la sonicazione è una procedura che prevede l'uso di ultrasuoni per frammentare il campione). La sonicazione porterà a frammenti casuali (ecco perché non si usano enzimi) del DNA.
A questo punto si deve procedere con l'immunoprecipitazione. Usando un anticorpo specifico per la nostra proteina di interesse immunoprecipitiamo l'intero complesso formato da DNA + proteina legata, filtrando così quella che vogliamo studiare nel mare di tutte le altre.
A questo punto abbiamo i frammenti di DNA legati alla proteina in esame. Dobbiamo trattare in modo da separare queste due componenti e ricavare solo il DNA. Questo verrà passato con un ciclo di PCR per essere amplificato.
Dopo la PCR fremo un gel dove metteremo tutto il nostro esperimento (tutti i punti) a correre e il risultato ci mostrerà una cosa tipo:
punto 0: nessuna banda
punto 1: nessuna banda
punto 2: banda molto intensa
punto 3: banda affievolita
punto 4: nessuna banda
Se questi fossero i risultati, questo saggio mostrerebbe che la nostra proteina è legata al DNA dal tempo corrispondente al punto 2 fino al tempo corrispondente al punto 3, dopo la stimolazione. Si può fare un saggio con i tempi più raccorciati (mezz'ora o un'ora invece di due ore) per avere un risultato più preciso, ma già con tempi più stretti di un'ora, se ci si lavora da soli, diventa molto difficoltoso |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6941 Messaggi |
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Kiola
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
 Inserito il - 21 gennaio 2009 : 15:09:32
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grazie mille...mi sei stato davvero utile!!!
e x il futuro???
speriamo di trovar qualcosa!!!
è meglio nn pensarci ora anche xkè altrimenti mando all'aria l'università e inizio a far la commessa!!!
=)
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