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1969rc
Nuovo Arrivato

10 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2009 : 11:15:28

Ciao

mi rivolgo a voi per capire se qualcuno mi pu� aiutare. Il mio problema � questo: devo fare dei western blot per una proteina il cui acronimo � PARP e non so molto n� della proteina, ma questo � un problema che posso risolvere velocemente, n� di western blot.
Magari tra di voi c'� qualcuno che lavora su questa proteina e fa dei western e gli/le sarei molto grato se mi desse qualche dritta su questa tecnica applicata a questa proteina, sopratutto per quanto riguarda la preparazione del campione, i vari gel da preparare e tamponi, in sintesi ogni consiglio � ben accetto.
Premetto che la mia proteina � stata estratta da tessuto tumorale di ratto.

Grazie

mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato

116 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2009 : 16:00:57

Mah io direi che il WB � uguale per tutte le proteine, cambia solo l'anticorpo primario che usi per legarle. Per sapere di piu sul WB dovresti trovare qualcosa su questo sito. Prova a cercare.
In merito alla preparazione del campione dipende molto dove si trova la proteina (nucleo, citosol, membrane...) e cosa determina la tua condizione speriemetale (solo un cambiamento di espressione o anche una migrazione da un comparto cellulare all'altro)? Quando saprai di piu della tua proteina e cosa gli succede durante la tua condizione sperimentale sceglierai il metodo migliore per preparare il campione.
spero di esserti stato utile

1969rc
Nuovo Arrivato

10 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2009 : 18:16:44

Certo! Ripeto qualsiasi dritta � ben accetta

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2009 : 19:33:21

Cerca in letteratura se qualcuno ha gi� fatto WB per quella proteina, soprattutto per vedere che anticorpi hanno usato. Poi per l'ottimizzazione del tutto devi andare un po' empiricamente...

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