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AC
Nuovo Arrivato



45 Messaggi
Inserito il - 16 febbraio 2006 : 21:33:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AC Invia a AC un Messaggio Privato  Rispondi Quotando

Ciao a tutti!!!
avrei bisogno di una informazione: devo estrarre del DNA da vino, Avete un protocollo da darmi senza dover ricorrere all'uso di kit commerciali?
Grazie mille!!!
CIAO

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 17 febbraio 2006 : 01:25:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Da vino! Wow... ricerca interessante!

Non l'ho mai fatto, prova a vedere questo articolo.
Usano un kit, ma puoi adattare la cosa.

Dovresti quindi aggiungere agenti denaturanti, agenti caotropici, detergenti (io andrei con SDS 0.1%) e proteinasi K. Lasci incubare 30' a 65 gradi, centrifughi il tutto e recuperi il surnatante.

A questo punto loro usano una colonnina, ma se vuoi evitare i kit puoi aggiungere ugual volume di isopropanolo, mischiare bene per inversione e poi centrifugare x 5' a temperatura ambiente, 13200 rpm.
Dovresti in questo modo avere un pellet di DNA (non è detto sia visibile ad occhio nudo).
Versi via il surnatante e lavi il pellet con etanolo 70%. Lasci evaporare all'aria per 10-20' e poi risospendi in un opportuno volume di TE (dipende un po' da quanto DNA hai ottenuto).
A questo punto lasci a 4 gradi o/n.

Il giorno dopo dai una vortexata veloce e sei pronto a fare PCR o quello che vuoi!
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AC
Nuovo Arrivato



45 Messaggi
Inserito il - 17 febbraio 2006 : 11:50:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AC Invia a AC un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille!!! Ci proverò

devo farti i miei complimenti... Tu hai una risposta per tutti!!

Grazie ancora!!!
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 17 febbraio 2006 : 13:04:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando


Poi facci sapere se funziona!
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AC
Nuovo Arrivato



45 Messaggi
Inserito il - 20 febbraio 2006 : 16:23:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AC Invia a AC un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao Chick

ho provato ma non funziona

provo a modificare qualcosa, grazie lo stesso
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