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claudiab
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
 Inserito il - 06 febbraio 2009 : 15:04:48
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Ciao ragazzi ,ho bisogno di voi..
Ho troppa confusione per quel che riguarda le tecniche di emoagglutinazione/inibizione , neutralizzazione , fissazione del complemento....ma nn finisce qui perchè nn ho capito come fare la titolazione virale con i seguenti metodi : delle placche , dell'emoagglutinazione , di reed e munch..
So di chiedere tanto ma vi prego aiutatemi anche con un link specifico perchè nn sono riuscita a trovare nulla..
Vi ringrazio in anticipo
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6941 Messaggi |
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claudiab
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 19:12:22
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Saresti il mio salvatore...grazie mille |
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claudiab
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 08 febbraio 2009 : 16:09:25
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| Ciao giuliano , confido ancora in te ! |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6941 Messaggi |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6941 Messaggi |
Inserito il - 08 febbraio 2009 : 19:12:49
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Allora, per la fissazione del complemento ti rimando a questa discussione
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=10621
La Neutralizzazione di un virus si ha quando esso diventa, per via degli anticorpi, incapace di legare i propri siti di legame, per questo si chiamano anticorpi neutralizzanti (quelli non neutralizzanti legano altre parti del virus che non interferiscono con il legame al recettore)
L'emoagglutinazione è un saggio di titolazione virale (o anticorpale, il concetto è lo stesso). Detto in parole molto molto molto povere, si basa sul concetto che i virus possono fare da ponte tra le emazie, questo vuol dire che due emazie possono essere legate tra loro se un virus lega entrambe. Il risultato è che i Globuli Rossi rimangono legati l'uno all'altro e pecipitano come una specie di tappeto. Il legame tra virus e emazie ovviamente dipende dalla concentrazione di entrambe le cose, ma tenendo fissa la concentrazione di GR e variando quella di virus si arriva ad un punto in cui il virus non è più sufficiente per emoagglutinare, quello è il titolo virale espresso in Unità EmoAgglutinanti (HAU). L'inibizione si ha con degli anticorpi che legano il virus o il sito di legame.
CPE50: effetto citopatico sul 50% dei pozzetti. Questa è un po' complicata da spiegare brevemente, anche qui ti rimando ad un link. Comunque, si chiama Reed Muench, non munch, ed è la formula statistica che ti permette di avere il titolo al 50%. Ad esempio, ho due diluizioni: 10^-7 e 10^-8 e alla prima ho effetto citopatico su 5 pozzetti su 8, nella seconda ho CPE su 3 pozzetti su 8. Evidentemente 5 è più di 4 (che è il 50%) e 3 è meno di 4, quindi il titolo è una via di mezzo tra 10^-7 e 10^-8. Lo calcoli appunto con la regoletta di Reed e Muench, che dice:
((% diluizione oltre il 50%)-50%)/((% diluizione sopra il 50%)-(% diluizione sotto il 50%))
Detta così non è un gran che come spiegazione, studiati questo protocollo:
http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=47
Titolazione per placche: anche qui brevemente, si fa un'infezione con un virus e invece di usare il terreno liquido si usa agar. Dopo qualche tempo il virus liserà le cellule e compariranno una specie di buchi sul tappeto cellulare in proporzione al titolo virale. Ovvio che se il titolo è troppo alto, il monostrato viene completamente distrutto. Basta contare queste aree di lisi (placche appunto) e moltiplicarle per il fattore di diluizione per avere il titolo virale
Ho scritto molto sommariamente, se hai altri dubbi chiedi pure |
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claudiab
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 08 febbraio 2009 : 22:44:33
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giuliano sei stato meraviviglioso , avevo proprio bisogno di spiegazioni semplici per capire il concetto...adesso posso studiare con le idee chiare..
Grazie grazie grazie e complimenti mi sembra di aver capito che conosci la materia molto bene...e forse proprio per questo ti disturberò qualche altra volta..
A presto |
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