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Messaggio inserito da Neuroscience

la procedura che hai descritto è esatta, tuttavia devi considerare che forse il plasmide è già purificato.

Insomma
1. Prova a correre il plasmide su un altro gel, può essere che lo hai fatto male
2. Prova a tagliare un aliquota di plasmide con un enzima di restrizione per linealizzarlo e corrilo di nuovo... i plasmidi non tagliati corrono sempre male
3. Prova a diminuire la % del gel a 0,8% e fallo correre lentamente rispetto ad un DNA plasmidico che già conosci e che sia puro
4. Prova a caricarne di meno su gel, quando metti troppo DNA nel pozzetto corre sempre male

Per il protocollo di purificazione del DNA
potresti aggiungere lo stesso volume di una soluzione Fenolo:cloroformio:alcool isamilico (rapporti 50:49:1)... agiti, poi centrifughi per pochi minuti a massima velocità per separare le fasi
Prendi la fase superiore acquosa senza toccare l'interfaccia tra le due soluzioni e senza prendere il fenolo sottostante.

La fase di sopra avrà il tuo DNA e lo metterai in un altra eppendorf con l'aggiunta di un 10% di una soluzione di NaAc 3M pH 5, agiti, 300% di Acool Etilico 95-99%... agiti...
metti a -20 °C per 30 minuti
centrifughi per 20 minuti a max velocità, butti l'alcool,
metti alcool 70%, centrifughi, butti l'alcool
metti di nuovo alcool 70%, centrifughi, butti l'alcool
centrifughi tutte le gocce rimaste e le togli con attenzione con una pipetta senza toccare il fondo bianco della provetta.

Asciughi per 5 minuti e poi aggiungi TE o acqua
ricarichi per quantizzare

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