estrazione RNA da tessuti in paraffina

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Autore

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alexct82
Nuovo Arrivato

Prov.: ct
Città: catania

26 Messaggi

Inserito il - 06 marzo 2009 : 15:57:13

Ciao a tutti.
Qualcuno potrebbe suggerirmi un protocollo per estrarre l'RNA da tessuti in paraffina?
In laboratorio abbiamo il trizol e un Kit per estrarre il DNA con le colonnine della quiagen (non so se si può usare anche per estrarre l'RNA, se tratto con DNase..)..
Grazie a chiunque potrà aiutarmi.

GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 06 marzo 2009 : 16:12:50

Guarda queste 2 discussioni in proposito:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=7824
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1192

cin
Utente Junior

Prov.: Padova
Città: Padova

558 Messaggi

Inserito il - 06 marzo 2009 : 16:37:04

Ricorda che la cosa più importante è cosa ci devi fare poi con quest'RNA.

elisabetta strafella
Nuovo Arrivato

18 Messaggi

Inserito il - 13 marzo 2009 : 18:07:04

Ciao estrarre RNA da tessuto in paraffina è abbastanz difficile perchè devi eliminare la paraffina con un apposito protocollo ossia vari passaggi in xilolo ed etanolo,omogenizzare il tessuto e usare colonnine apposite per RNA. La paraffina crea dei legami ss con il materiale nucleare per cui quando si deparaffina l' RNA si rompe quindi dovresti provare a vedere che cosa riesci a recuperare,
Fammi sapere ciao

283
Nuovo Arrivato

115 Messaggi

Inserito il - 16 maggio 2012 : 10:19:27

a tal proposito..qualcuno sa se si può estrarre rna da tessuti fissati in PFA?

biotool
Nuovo Arrivato

97 Messaggi

Inserito il - 24 maggio 2012 : 00:26:42

confermo la difficolta' di ottenere RNA in quantita' e qualita' sufficiente per poter fare succesivamente ad esempio una PCR.
Un kit specifico a tale scopo: RNeasy FFPE Kit della qiagen con il suo protocollo.

Berkana
Nuovo Arrivato

Città: Perugia

1 Messaggi

Inserito il - 27 agosto 2013 : 13:17:33

Buongiorno a tutti, attualmente sto utilizzando il kit qiagen rneasy ffpe con alcune modifiche nel protocollo e devo dire che per quanto riguarda la purezza dell'rna ricavato si ottengono ottimi risultati. Per quanto riguarda la qualità invece ci sono ancora un pò di difficoltà perchè l' Rna è molto degradato , la retrotrascizione riesce usando superscript + esarandom ma in PCR successivamente si riescono ad amplificare solo frammenti corti, max 150 bp... C'è qualcuno che ha esperienza di questo kit e riesce ad amplificare frammenti almeno di 300bp? Grazie mille per l'attenzione :)