| Autore |
Discussione |
|
|
Dr.Marshall
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
 Inserito il - 16 marzo 2009 : 17:34:27
|
Buongiorno a tutti,
sto facendo PCR con primers univesali per batteri e da qualche tempo il "bianco" mi viene sempre inquinato; uso la corretta prassi per la PCR ed ho cambiato primers(che compro con MWG) e Taq Magnesio e Buffer (prima usavo Eurotaq ed ora uso la Fisher ma il problema è rimasto!)più volte, sempre senza risultato...può essere che i reagenti siano inquinati all'origine? A qualcuno è mai capitato qualcosa di simile??
Grazie a tutti
|
|
|
|
|
miky76
Utente Junior
126 Messaggi |
 Inserito il - 16 marzo 2009 : 18:38:23
|
ciao
hai una contaminazione da qualche parte
il bianco ha solo acqua... quindi nn dovrebbe darti un prodotto PCR
hai provato a cambiare dNTP
o forse anche la sola acqua che usi... potrebbe essere quella contaminata
|
 |
|
|
Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 16 marzo 2009 : 19:28:49
|
| O se non usi puntali col filtro potrebbe essere contaminata anche la pipetta... |
 
 |
|
|
|
Dr.Marshall
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2009 : 09:48:47
|
Ho cambiato diverse volte dNTP, uso filette di acqua sterilemonouso e puntali sterili con filtro. Ho anche recentemete autoclavato le micropipette..tutto senza risultato!
 ...non so più cosa provare!!!
Ogni consiglio è comuque bene accetto....
Grazie |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2009 : 10:16:31
|
Citazione:
Ho anche recentemete autoclavato le micropipette.
Scusa, che micropipette usi? Sei stata fortunata che non si sono sciolte... comunque autoclavarle credo sia un ottima maniera di stararle... |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2009 : 10:19:55
|
Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Citazione:
Ho anche recentemete autoclavato le micropipette.
Scusa, che micropipette usi? Sei stata fortunata che non si sono sciolte... comunque autoclavarle credo sia un ottima maniera di stararle...
Esistono le micropipette autoclavabili!!!  |
|
|
|
Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2009 : 10:51:53
|
Ah ecco..no perchè ricordo un certo articolo satirico
comparso sul Journal of Molecular Proctology :D :D :D .... |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
|
|
|
|
Dr.Marshall
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2009 : 11:22:36
|
| Le pipette che uso sono certificate autoclavabili, ovviamente! |
|
|
|
marok
Utente Junior
150 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2009 : 11:58:22
|
| La contaminazione si è verificata in concomitanza del cambio di taq o l'avevi già trovata? Controlla che vettore usano per produrre la taq, se è un batterio non è così strano trovarci del DNA dentro (dovrebbe essere specificato). Comunque prova ad usare altre pipette perchè l'autoclave non fa assolutamente niente al DNA. |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
|
|
Dr.Marshall
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2009 : 17:18:17
|
Non sono sicuro se la contaminazione sia iniziata con il cambio di taq o no, comunque ho controllato e il vettore che usano per quella che ho in uso adesso è un batterio..ma dovrebbe essere purificata, almeno spero!!
 |
|
|
|
mak_steon
Utente Junior
138 Messaggi |
Inserito il - 18 marzo 2009 : 10:16:59
|
Se l'inquinamento è una sola banda e magari si vede bene potresti provare a identificare il batterio così da vedere la fonte dell'inquinamento.
Soprattutto quando si utilizza lo stesso materiale in più gruppi di ricerca... magari te fai tutto per bene e poi un'altro ti inquina sistematicamente le pipette o altro (è successo) |
|
|
|
vatam
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 22 marzo 2009 : 16:24:08
|
| Sei sicuro che usi le bene concentrazioni? (mi scusi per i errori ma non solo italiano) |
|
|
|
Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1915 Messaggi |
Inserito il - 22 marzo 2009 : 16:38:51
|
| pensate che ci sono quelli che mettono le pipette contaminate sotto gli UV ... pensando che si decontaminano ... |
|
|
|
|
Dr.Marshall
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 23 marzo 2009 : 15:25:02
|
Patrizio sei dotato di grande senso dello humor, indubbiamente, peccato che la tua risposta sia davvero di scarsa utilità...se gli UV dici che non son in grado di decontaminar le pipette, quale soluzone proponi? Son qua in cerca di risposte, non di squallida ironia!
Grazie invece a tutti coloro che han provato a darmi consigli utili, anche se, ahimè, non sono ancora riuscito a risolver il problema!
p.s.Patrizio, poichè siamo (spero) tutti dottori, proviamo almeno ad usare i modi verbali correttamente (decontaminIno, non decontaminAno!!!!!!!!!!!!!) |
|
|
|
Dr.Marshall
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 30 marzo 2009 : 12:32:41
|
Ciao a tutti ancora.
Ho provato a cambiare primers usando primers universali per Bifidobatteri e la PCR è venuta pulita dunque ho imputato la colpa ai primers universali per batteri e li ho riordinati. Venerdì ho fatto una pcr di prova, che è venuta ancora sporca, e stamattina ho provato ad amplificare altri campioni: il bianco è venuto sporco ma alcuni campioni non si son amplificati....non so davvero che fare...
Credete che sia possibile che siano le eppendorf ad essere inquinate?
Heeeeelp!!!! |
|
|
|
Raquel_80
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 01 novembre 2009 : 12:03:01
|
buongiorno, appena iscritta, ho letto un pò di botta e risposta sulle PCR inquinate...risolto il problema?? Io nn so cosa fare..tutto quello che empiricamente ho capito (credo) è che:
1)di tutti i reagenti, gli unici che si inquinano sono i PRIMER.
2)Ci sono PRIMER che si inquinano molto facilmente, che devo cambiare praticamente ogni volta che li uso...e PRIMER che nn si inquinano mai...
Perchè? riflette anche la vostra esperienza??
Grazie!! |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
|
| |
Discussione |
|
PCR con primer universali x batteri..
Didattica
