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Paoloragno
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
 Inserito il - 24 marzo 2009 : 22:17:15
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Ciao a tutti ! Ho ripreso in mano un protocollo per WB dopo un pò di anni. Al primo, ed unico, tentativo tutto più o meno bene fino alla corsa elettroforetica. Come da indicazioni ho settato il power supply a 250 V, 20 mA. ma la corsa è lentissima perchè il massimo di amperaggio che registro è 10 mA. La camera mi sembra ok e l'unico problema che rilevo potrebbe essere nel running buffer ...domani riproverò con una nuova ricetta. Intanto voi che cosa suggerite?
Grazie!!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 24 marzo 2009 : 23:20:08
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Sì, se hai problemi di amperaggio è probabile che sia un problema di buffer, assicurati che sia fresco e controlla anche il pH (anche se quello dovrebbe influenzare più che altro la bontà della corsa, non la velocità).
Altra cosa da controllare è che gli elettrodi della camera non siano sporchi. |
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Paoloragno
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 11:12:28
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Ciao Chick, ho ripreso tutto (buffer compresi). Vediamo un pò cosa ne viene fuori.
Grazie per della risposta!
paolo |
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angemore
Nuovo Arrivato
82 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 12:28:01
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| Anche secondo me potrebbe essere un problema di pH oppure potresti controllare se è precipitato l'SDS, a volte quando fà un pò freddo capita. Ciao |
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Paoloragno
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 15:07:18
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Ho riprovato cambiando la ricetta del buffer (144g glicina, 30g TRIS, 100 ml SDS) e le cose non sono
granchè migliorate. L'amperaggio non rimane comunque costante...mah |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 18:54:50
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Ciao
Quello che hai riportato è il protocollo del tris-glicina 10X (se lo sapevi già non tenere conto di questa risposta ovviamente)
Ciao |
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Paoloragno
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 21:27:00
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Si certo. In effetti le cose sono andate meglio: amperaggio e voltaggio sono rimasti più o meno costanti ma la corsa era comunque lenta, domani sviluppo. In ogni caso proverò ancora, tutto da capo e tutto fresco. Ti ringrazio comunque per l'aiuto Chick. Ti faccio sapere.
GRAZIE
paolo |
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Paoloragno
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 27 marzo 2009 : 22:35:49
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Purtroppo la cosa non è andata a buon fine: la corsa è stata comunque incompleta oltra che lenta. Non mi resta che riprovare. Il principale indiziato rimane comunque il RB.
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Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 14:28:32
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ciao,
scusa, da quello che hai scritto non ho capito molto bene il tuo problema, cosa intendi per corsa lenta?
i gel a che % sono?
A occhio se il fronte del blu si muove bello pari e vedi il marker separarsi bene la corsa è buona, anche se 250V mi sembrano un po' troppi per un discorso di riscaldamento del campione. |
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Paoloragno
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:23:48
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Ho risolto il problema: non aprivo le levette del basso della camerette. E' la prima volta che uso queste maledette Hoefer. Io usavo quelle Bio rad, sicuramente più semplici e funzionali ma avrei dovuto comunque leggere le istruzioni. Pe rispondere a Ricciola: il voltaggio consigliato è 150-200 V 15-20 mA.
Grazie a tutti in ogni caso |
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Elettroforesi WB lenta
Didattica
