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Autore Discussione  

Frin74
Nuovo Arrivato



17 Messaggi
Inserito il - 09 aprile 2009 : 20:54:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Frin74 Invia a Frin74 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
salve avrei bisogno di un'informazione e cioè dovrei trasformare un sito di restrizione riconosciuto da BamHI e cioè GGATCC nel sito riconosciuto da KpnI GGTACC, come si può notare la sequenza è quasi simile ma le due basi centrali sono invertite attraverso una mutagenesi sito diretta ho la possibilità di cambiare le due basi contemporaneamente? cioò con un solo oligo?
grazie
Frin

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi
Inserito il - 10 aprile 2009 : 00:08:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Assolutamente sì.... Io ne ho cambiate anche 3 contemporaneamente e non ho avuto problemi...
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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Frin74
Nuovo Arrivato



17 Messaggi
Inserito il - 10 aprile 2009 : 23:53:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Frin74 Invia a Frin74 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie per la risposta e se ho ben capito mi devo disegnare un oligo con due basi mutate giusto??
cia
Frin
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Frin74
Nuovo Arrivato



17 Messaggi
Inserito il - 10 aprile 2009 : 23:54:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Frin74 Invia a Frin74 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
per caso usi un kit particolare per la mutagenesi sito diretta?
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domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi
Inserito il - 11 aprile 2009 : 09:19:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io utilizzo il kit della Stratagen.
Se ti iscrivi al qui:
http://www.stratagene.com/tradeshows/feature.aspx?fpId=118
Puoi anche usare un tool che disegna il primer con la mutazione che preferisci...
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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Frin74
Nuovo Arrivato



17 Messaggi
Inserito il - 13 aprile 2009 : 23:24:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Frin74 Invia a Frin74 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
qualcuno ha un protocollo di mutagenesi sito diretta (in questo caso devo solo cambiare una base) ma non ho soldi per comprare il mitico kit della stratagene!!!??
grazie
Frin
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mollichina di pane
Utente Junior

Miyu



121 Messaggi
Inserito il - 14 aprile 2009 : 10:19:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mollichina di pane Invia a mollichina di pane un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io seguo questo protocollo:
http://nar.oxfordjournals.org/cgi/content/full/32/21/e174

Cambio le condizioni di PCR in base alla Taq che utilizzo e ai primers.
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