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Discussione

onore
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 17 aprile 2009 : 21:12:02

Ciao a tutti:
sto estraendo DNA da foglie liofilizzate campionate in fase giovanile (mi aspetto di avere tantissimo DNa in quanto in questa fase le cellule sono in intensa attivit� di divisione, dovrei anche avere pochi polisaccaridi dato che le pareti cellulari nn sono ispessite visto l'eta delle foglie). uso il protocollo di Gomez 1999. ottengo una mucillaggine evidente e abbondante, durante i passaggi in isopropanolo e etanolo freddi si forma la classica lanuggine. ecco il problema, alla corsa di agarosio nn vedo bande. nn vedo niente di niente...alla lettura al nanodrop nn mi rileva presenza di DNA...ma nn � possibile!!!!

miky76
Utente Junior

126 Messaggi

Inserito il - 18 aprile 2009 : 11:02:43

ciao

non conosco il protocollo che usi
ma possibilissimo che hai perso il DNA in un passaggio
soprattutto se il nanodrop non lo quantifica

senti... dopo la fase etanolo/isopropanolo
hai un pellet? lo vedi?
perche' magari togliendo l'isopropanolo si stacca il pellet e lo perdi

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 18 aprile 2009 : 11:11:21

Concordo con miky76. La lettura al nanodrop la fai subito dopo l'estrazione? Se s� allora non ci sono molti passaggi dove lo puoi avere perso direi.

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onore
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 19 aprile 2009 : 18:17:49

Ciao, il pellet dopo i passaggi c'� ed evidente. � veramente difficile che o lo abbia perso, la mia paura � che lo stadio di campionamento delle giovani sia troppo precoce e allora la quantit� di polisaccaridi � tale che l'estrazione viene compromessa. anche xche � un protocollo che ho usato altre volte e nn mi ha mai dato problemi. prover� a ricampionare...

legolas
Utente

Prov.: Lecce
Citt�: Trepuzzi

723 Messaggi

Inserito il - 19 aprile 2009 : 18:33:41

infatti prova e vedi, anche io concordo con gli altri colleghi