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Autore

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caralinda79
Nuovo Arrivato

Città: firenze

21 Messaggi

Inserito il - 23 aprile 2009 : 15:53:28

Salve a tutti!
Devo utilizzare la Real-Time per quantificare l'espressione di 4 geni, incluso l'housekeeping, in 4 campioni (cDNA derivanti da diversi trattamenti)

il primo step consiste nella determinazione della curva standard dei 4 geni

ho un dubbio: devo ottenere la curva standard per ogni gene nei 4 cDNA oppure basta utilizzarne uno solo? ho letto che si può usare un qualunque campione purchè tra i trascritti sia presente il gene considerato e l'housekeeping ma non so se è corretto!!

quindi devo fare 4 curve o 16? Aiuto!!

GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 23 aprile 2009 : 19:17:32

4! Una per ogni gene!
In questo caso la curva standard ti serve solo per valutare l'efficienza della real time, poi quando analizzerai i tuoi campioni normalizzi rispetto all'housekeeping.

Prendi un campione dove sei sicura che siano espressi tutti i geni, fai diluizioni seriali dello stesso cDNA e ti costruisci la curva standard.

caralinda79
Nuovo Arrivato

Città: firenze

21 Messaggi

Inserito il - 24 aprile 2009 : 09:25:09

Allora avevo capito bene! questo mi fa molto piacere perchè ho poco rna..
Grazie!!