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farmacologia
Nuovo Arrivato
100 Messaggi |
 Inserito il - 11 maggio 2009 : 17:38:54
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ciao a tutti.
potreste, cortesemente, insegnarmi la strategia per disegnare un anticorpo contro una proteina??
per esempio io avrei intenzione di disegnare la sequenza aminoacidica rivolto contro la regione C-temninale di p75.
non ne esisono in commercio, ma a parte questo, vorrei imparare come approcciarmi a tale difficoltà.
ringrazio tutti coloro che vorranno aiutarmi, considerando che sono medico ma mi affascinano le biotecnologie.
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2009 : 18:35:34
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Per la risposta sulla strategia per produrre un anticorpo contro una regione specifica lascio fare a chi ci lavora!
Però magari spiega meglio la tua richiesta, è solo una domanda a livello teorico oppure vuoi veramente produrti tu l'anticorpo?
Dovresti avere le strutture adatte per farlo, altrimenti ti puoi rivolgere ad una ditta che fornisca questo servizio.
Comunque:
Citazione:
Messaggio inserito da farmacologia
...per esempio io avrei intenzione di disegnare la sequenza aminoacidica rivolto contro la regione C-temninale di p75.
non ne esisono in commercio...
Sicuro?
Se per regione C-terminale intendi la porzione citoplamatica di p75 (aa 273 – 427) io ne ho trovati 3 senza grossa fatica, e non escludo ce ne siano altri!
http://www.promega.com/techserv/tools/abasst/AntibodyPages/Antip75pab.htm
Sigma-Aldrich HPA004765
http://www.everestbiotech.com/acatalog/EB06775.html |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2009 : 21:05:52
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Ad ogni modo l'idea è:
1) ottenere il peptide purificato
1b) se il peptide non è immunogenico andrà coniugato a qualcosa di immunogenico, es. albumina
2) iniettarlo in un animale
3) recuperare il plasma
4) purificare l'anticorpo specifico (es. con cromatografia di affinità per il peptide)
5) validare l'anticorpo
Detto questo concordo con GFPina, non è una cosa che fai proprio in un paio di mesi... |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2009 : 23:17:00
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Guardati questa discussione. Si parla della produzione di anticorpi policlonali ma è spiegato più in dettaglio. Lo puoi usare anche per produrre anticorpi monoclonali ma dovrai sacrificare l'animale e prelevare la milza e poi procedere con la tecnica degli ibridomi...Ti auguro di avere una pipetta multicanale! =P
P.S.: Dimenticavo che non tutte le porzioni delle proteine sono sufficientemente immunogeniche, si fa infatti un'analisi della potenziale immunogenicità con dei software. Devi inoltre considerare a che scopo devi usare l'Ab. Se ti serve in Western Blotting ad esempio, dove la tua proteina d'interesse è denaturata, allora puoi sfruttare l'intera sequenza proteica per effettuare l'analisi e decidere la sequenza bersaglio perché la proteina non avrà struttura terziarie o secondarie se denaturata. Se invece ti serve per altri scopi devi tener conto di quali sono le porzioni esposte nella struttura tridimensionale della tua proteina d'interesse perché un Ab non raggiunge siti interni...a meno che non hai intenzione di produrre minibodies di dromedario o squalo... =P |
 
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farmacologia
Nuovo Arrivato
100 Messaggi |
Inserito il - 12 maggio 2009 : 22:29:05
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Grazie a tutti.
il mio problema non è farmi l'anticorpo (magari ne avessi la capacità).
Come dice, giustamente, GFPina, lascio il lavoro a chi lo sa fare.
Su questo non vi è dubbio!!!!!!!!!!!!!
ma anche l'approccio con voi è al massimo dell'umiltà e della consapevolezza dei miei limiti.
di contro vorrei imparare la tecnica per disegnare la sequenza aminoacidica dell'Ab della porzione C-terminale sufficientemente immonogenica.
l'Ab mi servirà per WB ed Immunoistochimica.
se potete e volete, aiutatemi.
grazie ancora
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 13 maggio 2009 : 02:34:26
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| Allora, se tu la vuoi per il C-terminale avrai un range di aa...prendi la sequenza degli aa che ti interessano, la dai in pasto al software che sinceramente adesso non mi ricordo come si chiama e poi trovi un peptide di una 20ina di aa...Il peptide va coniugato a proteine come la KLH (Keyhole Lympet Hemocyanin) allo scopo di aumentarne l'immunogenicità...Poi puoi vedere il protocollo sul link che ho messo...Con l'Ab policlonale puoi fare WB tranquillamente, lo facevano nel lab dove ho fatto tirocinio tranquillamente di routine...L'immunoistochimica è un pò più delicata e ti servirebbe un monoclonale il che implica tutti i passaggi per il policlonale, in più la tecnica degli ibridomi che ti porta via parecchio tempo prima di arrivare al clone di interesse...Per qualsiasi informazione fai domande... :) |
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farmacologia
Nuovo Arrivato
100 Messaggi |
Inserito il - 13 maggio 2009 : 06:24:05
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Grazie.
se fai uno sforzo di memoria e mi indichi il software te ne sarei grato.
ne approfitterò per la disponibilità.
a presto |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 13 maggio 2009 : 14:07:29
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Citazione:
Messaggio inserito da farmacologia
Come dice, giustamente, GFPina, lascio il lavoro a chi lo sa fare.
Si io intendevo che magari poteva risponderti qua sul forum qualcuno che lo fa praticamente in laboratorio, sarebbe una discussione interessante. Io "praticamente" non l'ho mai fatto, anche se la teoria l'ho studiata! 
Ma il problema come ti dicevo è avere le strutture.
Comunque mi sembra che sulla teoria Schuldiner86 ti abbia dato delle ottime risposte! 
Aggiungo solo questo:
Citazione:
Messaggio inserito da farmacologia
l'Ab mi servirà per WB ed Immunoistochimica.
Una volta che hai prodotto l'anticorpo non è affatto detto che funzioni per entrambe le applicazioni, devi testarlo!
Potrebbe funzionare benissimo in Immunoistochimica e non funzionare affatto in WB, o viceversa. |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 14 maggio 2009 : 13:17:24
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| Ho guardato anche stamattina ma la fotocopia dove avevo il grafico non riesco più a trovarla, mi dispiace. Ma penso che se fai una ricerca su google con "antigenicity +software" qualcosa troverai sicuramente. Per quanto riguarda la pratica, nella produzione di un monoclonale io ho fatto tutta la parte che diciamo è cellulare per il semplice problema che gli studenti non sono autorizzati ad entrare allo stabulario. Alla mia facoltà però nello stabulario avevano fatto un video con tutti i passaggi, che però non so dove reperire. |
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disegnare un anticorpo
Didattica
