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Autore

Discussione

andreactf
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 11 maggio 2009 : 22:52:02

se devo fare un clonaggio come faccio a decidere su quale primer (reverse o foward )devo mettere le sequenze riconosciute dagli enzimi di restrizione?

GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 11 maggio 2009 : 23:17:02

Le devi mettere su entrambi! Altrimenti ti si attaccherebbe solo un'estremità al vettore, a meno di non fare un clonaggio con una estremità blunt l'inserto tagliato e vettore tagliato devono essere complementari.

Schuldiner86
Utente Junior

Prov.: Viterbo
Città: Bologna

581 Messaggi

Inserito il - 11 maggio 2009 : 23:23:59

Le sequenze riconosciute dagli enzimi di restrizione vanno sia sul primer forward che reverse, altrimenti come faresti ad avere le due estremità coesive che ti sono necessarie? Meglio ancora se metti sequenze riconosciute da due enzimi di restrizioni diversi sui due primers, potendo effettuare un clonaggio direzionale, utile nel caso tu voglia far esprimere quello che cloni.

andreactf
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 12 maggio 2009 : 09:04:18

quindi uso un forward e un reverse su pcr per amplificare il segmento e poi lo tratto con enzimi di restrizione per avere estremità coesive che mi permettano di legarlo a un vettore? cosi torna? grazie tante

GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 12 maggio 2009 : 18:24:11

Citazione:
Messaggio inserito da andreactf

quindi uso un forward e un reverse su pcr per amplificare il segmento e poi lo tratto con enzimi di restrizione per avere estremità coesive che mi permettano di legarlo a un vettore? cosi torna? grazie tante

Si è così!