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Autore Discussione  

CRISTIAN
Nuovo Arrivato



92 Messaggi
Inserito il - 25 maggio 2009 : 18:16:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di CRISTIAN Invia a CRISTIAN un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti!
sto facendo delle transfezioni in cellule eucariotiche e sto usando il vettore pcDNA3.1 dell'Invitrogen con all'interno il mio gene di studio(una citochina), come vettore vuoto di controllo posso utilizzare il vettore già pronto pcDNA3.1 contenente solamente il gene reporter lacZ (visto che è già presente nel kit..)?
grazie

Patrizio
Moderatore

mago

Città: Barcellona


1914 Messaggi
Inserito il - 25 maggio 2009 : 22:20:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se l'hanno messo apposta,direi di si
ma essendo un vettore di espressione,cosa te ne fai se trasfetti anche quello con lacZ ?
cioè il controllo dovresti farlo su cellule non trasfettate ..a parer mio

Aaaaa ma non e' che lacZ ti serve come controllo nella trasformazione?

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CRISTIAN
Nuovo Arrivato



92 Messaggi
Inserito il - 26 maggio 2009 : 18:36:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di CRISTIAN Invia a CRISTIAN un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Forse non mi sono spiegato.. le cellule transfettate non sarebbero un controllo negativo, ma il vero contr negativo sono le cellule transfettate con il corrispondente plasmide vuoto(anzichè metterci il mio gene non ci metto nulla).
Ovviamente il plasmide contenente lacZ serve proprio come controllo della percentuale di transfezione, ma la mia domanda è:
Qualcuno ha mai usato il pcDNA con lacZ solamente come controllo negativo per verificare se la transfezione del vettore con il mio gene di interesse mi da un risultato diverso dalla transfezione con il solo vettore??

P.S. non posso usare il mio vettore senza inserto (pcDNA3.1 TOPO directional) perchè è linearizzato e non si richiude senza la presenza di un inserto..dovrei piuttosto acquistare un vettore vuoto circolare da un'altro kit.
Volevo usare il pcDNA3.1/lacZ perchè sarebbe già presente all'interno del kit.
Grazie infinite a tutti se potete aiutarmi
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darkene
Utente Junior

occhi



291 Messaggi
Inserito il - 26 maggio 2009 : 22:27:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di darkene Invia a darkene un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
trasfettando il vettore con LacZ ti permette di verificare 2 cose:
1. l'efficienza di trasfezione
2. che la trasfezione di un plasmide che non esprime il tuo gene d'interesse non produce l'effetto biologico che vuoi studiare trasfettando il tuo gene.

quindi si, è un ottimo controllo, e per questo che è presente nel kit!
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CRISTIAN
Nuovo Arrivato



92 Messaggi
Inserito il - 26 maggio 2009 : 22:51:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di CRISTIAN Invia a CRISTIAN un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie Ivano ma il fatto è che praticamente tutti gli articoli che fanno transfezioni usano il vettore vuoto..
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