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Discussione

fradeejay85
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2009 : 12:37:42

Ciao a tutti, sto provando ad individuare il TNF alfa in campioni di tessuto epatico con la tecnica Western, ma anche variando le concentrazioni di AbI e proteina continuo ad avere risultati negativi, la positivit� � aspecifica e diffusa su tutta la membrana. Qualcuno pu� suggermi qualche passaggio per eliminare questo problema (es:incubazioni con latte)?
Grazie 1000 a tutti!

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2009 : 15:02:52

innanzitutto sei sicuro che il tuo anticorpo funzioni bene? Hai un controllo positivo?

Inoltre non ho capito questo:

Citazione:
la positivit� � aspecifica e diffusa su tutta la membrana.

se intendi che hai la membrana (o meglio la lastra) con un fondo nero (o grigio) diffuso, quella non � positivit� ma � fondo e si elimina innanzitutto facendo un blocco iniziale (ad es. con latte 5%), ma scusa tu non lo fai questo passaggio? Poi si pu� utilizzare l'anticorpo sciolto in TBS/latte o TBS/BSA anzich� solo in TBS.