Salve a tutti, ho un problema che descrivo: ho da analizzare una proteina maturasi batterica da circa 8 kDa solubile, l'ho espressa in E. coli usando pET inducendo con IPTG, analizzando le cellule dopo 1h e 3h di induzione e facendo un SDS-PAGE colorando con blu di Comassie ed è venuto fuori che è stata indotta una proteina dal peso di circa 16 kDa ed è concentrata principalmente nel pellet mentre nel surnatante la banda (quella da 16 kDa) era praticamente invisibile. Abbiamo notato anche che all'altezza del peso di 8 kDa non si notano differenze fra non indotto e indotto. Per sicurezza abbiamo mandato a sequenziare il frammento clonato ed è corretto. Qualcuno ha qualche idea sul perchè potrebbe essere venuto fuori questo risultato?
Perchè non provi a fare un western per verificare se la proteina di 16kDa non sia altro che il dimero della proteina di tuo interesse (se viene riconosciuta dall'anticorpo allora è così). In questo caso è possibile che si abbia così tanta induzione che la proteina tende a dimerizzare e a finire nei corpi di inclusione (ecco perchè poi la ritrovi nel pellet).