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Lisa80
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4 Messaggi
Inserito il - 23 giugno 2009 : 14:25:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Lisa80 Invia a Lisa80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ci sto accingendo ad effettuare una estrazione di RNA con trizol da siero....si un protocollo un pò particolare.
alcuni autori consigliano di effettuare una purificazione con fenolo-cloroformio acido.
ED è proprio in questa fase che temo di perdere il mio campione, volevo pertanto chiedere un consiglio su quale fosse il modo migliore per effettuare tale purificazione, e soprattutto se poi mi conviene purificare con etanolo o con NaAc

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 23 giugno 2009 : 19:07:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
... scusa ma mi sfuggono molte cose...
innanzitutto con Trizol fai già una estrazione con fenolo acido/cloroformio (vedi ad es. http://openwetware.org/wiki/RNA_extraction_using_trizol/tri)
poi consigliano una ulteriore purificazione?
Potrebbe essere che consiglino una ulteriore purificazione con fenolo/cloroformio per avere un RNA più puro, ma ovviamente rischi di perdere materiale... devi vedere se "il gioco vale la candela".
Infine:
Citazione:
e soprattutto se poi mi conviene purificare con etanolo o con NaAc

questa proprio non l'ho capita!!!
Alcool (ad es. etanolo) e sali (ad. es. NaAc) "collaborano" per far precipitare gli acidi nucleici, non sono uno il sostituto dell'altro!
Non ho capito assolutamente cosa vorresti fare.
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