purificazione fenolo cloroformio

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Discussione

Lisa80
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 23 giugno 2009 : 14:25:55

Ci sto accingendo ad effettuare una estrazione di RNA con trizol da siero....si un protocollo un p� particolare.
alcuni autori consigliano di effettuare una purificazione con fenolo-cloroformio acido.
ED � proprio in questa fase che temo di perdere il mio campione, volevo pertanto chiedere un consiglio su quale fosse il modo migliore per effettuare tale purificazione, e soprattutto se poi mi conviene purificare con etanolo o con NaAc

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 23 giugno 2009 : 19:07:51

... scusa ma mi sfuggono molte cose...
innanzitutto con Trizol fai gi� una estrazione con fenolo acido/cloroformio (vedi ad es. http://openwetware.org/wiki/RNA_extraction_using_trizol/tri)
poi consigliano una ulteriore purificazione?
Potrebbe essere che consiglino una ulteriore purificazione con fenolo/cloroformio per avere un RNA pi� puro, ma ovviamente rischi di perdere materiale... devi vedere se "il gioco vale la candela".
Infine:

Citazione:
e soprattutto se poi mi conviene purificare con etanolo o con NaAc

questa proprio non l'ho capita!!!
Alcool (ad es. etanolo) e sali (ad. es. NaAc) "collaborano" per far precipitare gli acidi nucleici, non sono uno il sostituto dell'altro!
Non ho capito assolutamente cosa vorresti fare.