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elenadea
Nuovo Arrivato

Prov.: NA
Citt�: napoli

15 Messaggi

Inserito il - 08 luglio 2009 : 17:30:15

salve a tutti volevo kiedervi qualcuno di voi ha mai sentito parlare di approcio morfologico e biochimico come metodo per dimostrare l'esistenza degli introni all'interno dei geni? sto avendo un pò d problemi a trovare una descrizione dell'approcio biochimico perchè sul watson non c'è! qualcuno può descrivermelo? sarebbe l'esperimento con l'ovoalbumina in cui si fa la mappa di restrizione del cDNA! grazie mille in anticipo!

ViruLenta
Nuovo Arrivato

20 Messaggi

Inserito il - 08 luglio 2009 : 17:56:16

Allora, praticamente si fa ibridare l'mRNA con il DNA da cui � stato trascritto, tramite la tecnica dell'R looping.
Se i geni eucariotici sono costituiti da sequenze lineari di nucleotidi codificanti ci si aspetta che i loro mRNA abbiano un quadro simile di ibridazione. Invece, negli esperimenti di R looping condotti su mRNA che codificano per proteine come l'ovoalbumina nel pollo o la beta-globina nell'uomo, si ottenevano anse multiple, invece che una sola: questo significava che le sequenze di DNA codificanti per un tipico mRNA eucariotico non sono continue e lineari ma sono separate da sequenza interposte che non compaiono nell'RNA messaggero finale. Queste sequenze sono proprio gli introni.
Poi per quanto riguarda le mappe di restrizione dei geni, esse sono comparate con quelle dei cDNA ottenuti trascrivendo l'mRNA di un gene con la trascrittasi inversa. Se si osservano differenze pi� o meno importanti tra le due, questo significa ch ci sono degli introni.

Non so se � chiaro e se � questo che volevi sapere...

elenadea
Nuovo Arrivato

Prov.: NA
Citt�: napoli

15 Messaggi

Inserito il - 08 luglio 2009 : 19:13:04

ti ringrazio x avermi risposto!!! pi� o meno s�! x� la mia prof � molto pignola..allora io tra gli appunti ho che faccio la mappa di restrizione e vedo ke in pratica mentre nell'mRNA non ci sono siti di taglio con il gene completo ho diverse bande dall'elettroforesi allora faccio due ipotesi:
1)ogni banda contiene tutto il gene( nn ho capito xk�)
2)ogni banda contiene un pezzo del gene quindi l'enzima di restrizione ha effettivamente tagliato il dna
a questo punto per controllare quale delle 2 ipotesi � quella reale faccio ibridazione con una sonda marcata divisa in 2 parti. � qui ke mi sono persa e non so kosa succede con questa sonda come faccio a dimostrare che realmente � la 2� l'ipotesi giusta...
eh lo so ke nn � semplice e magari nn tutti i prof la spiegano cos�...

ViruLenta
Nuovo Arrivato

20 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2009 : 00:26:03

Mi dispiace, ma io non sono entrata cos� nello specifico perch� faccio medicina. Sul mio libro c'� un disegno dell'elettroforesi di cui parli e in didascalia dice che il taglio del cDNA purificato dell'ovoalbumina di pollo con l'enzima di restrizione HaeIII genera due frammenti; il taglio del DNA con lo stesso enzima ne genera tre. Quello che manca nel primo � proprio sull'introne e quindi non appare sull'mRNA finale dell'ovoalbumina da cui il cDNA � stato derivato.

Magari qualche futuro biologo ti sapr� rispondere meglio

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2009 : 08:04:33

In questi casi la cosa migliore da fare � andare a cercare l'articolo originale e leggerlo!

Eccolo qui:
The ovalbumin gene: structural sequences in native chicken DNA are not contiguous. - Lai et al. PNAS, 1978

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elenadea
Nuovo Arrivato

Prov.: NA
Citt�: napoli

15 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2009 : 10:48:26

grazie mille chick80 ;) io nn ero riuscita a trovare nemmeno l'articoo originale.... ;) grazie cmq anke a te viruLenta!!

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