Problema con anticorpo western

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Discussione

Paola.p
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 08 luglio 2009 : 16:00:36

ho problemicon il mantenimento di un anticorpo primario antirabbit che riconosce una proteina di membrana,non si mantiene neltempo e riesco solo a fare pochi western.avete un metodo utile???

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 08 luglio 2009 : 21:38:23

Potresti spiegarti meglio?
E' tutto l'anticorpo che non si conserva o quello diluito per il western blot?
Come lo conservi?

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2009 : 15:57:05

Citazione:
Messaggio inserito da Paola.p

ciao,devo testare un protocollo che migliori nettamente la resa dei miei western per anticorpi primari che tendono a non funzionare dopo poche applicazioni massimo due.

Non � detto che sempre un anticorpo (diluito immagino) duri per pi� applicazioni. Ogni volta che fai il western con il tuo anticorpo una parte si legher� alla membrana e una parte rimarr� in soluzione, quindi quando tu togli la soluzione contenente l'anticorpo ogni volta ce ne sar� sempre meno!
Se l'anticorpo � poco concentrato o se ne lega tanto � normale che non ti funzioni per pi� di 2 applicazioni.
Non c'� molto che si possa fare, puoi provare ad aumentare la concentrazione (ma ovviamente useresti pi� anticorpo) oppure puoi aggiungere solo un pochino di anticorpo fresco alla diluizione dopo la seconda volta che la utilizzi.