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mical
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1 Messaggi

Inserito il - 01 agosto 2009 : 11:10:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mical Invia a mical un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
per fare una PCR deve aggiungere 10U/microlitri M-MLV; a cosas equivale 10U/microlitri?

GFPina
Moderatore

GFPina

Cittā: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 01 agosto 2009 : 15:41:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
10U/microlitri sono 10 Unitā/microlitri.
La concentrazione di enzimi viene sempre espressa in UNITA'.
Nel caso della M-MLV ad es.
Citazione:
One unit is the amount of enzyme required to incorporate 1nmol of deoxynucleotide into acid-precipitable material in 10 minutes at 37°C.
(da M-MLV Reverse Transcriptase - Promega)


Dovresti gurdare quanto č concentrata la tua M-MLV (ad es. 100U/ul, 200U/ul...) e fare i conti di quanta ne metti nella soluzione finale.
Leggit queste pagine per vedere come si fanno le diluizioni: http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/diluizioni.asp

Una piccola nota:
Citazione:
Messaggio inserito da mical

per fare una PCR deve aggiungere 10U/microlitri M-MLV...

La M-MLV č una retrotrascrittasi e serve per fare la retrotrascrizione (RT), non la PCR. La aggiungi in una mix di PCR solo nel caso tu stia facendo una RT-PCR one step.


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