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vesania
Nuovo Arrivato

bravo
Città: rovigo-ferrara-rovigo


98 Messaggi
Inserito il - 07 agosto 2009 : 15:35:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di vesania Invia a vesania un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti, volevo esporvi un mio problema e vorrei capire come si può ovviare a questo inconveniente e capire il motivo di tutto ciò.
Allora in seguito ad amplificazione, il segmento genico viene sottoposto a digestione enzimatica per verificare la presenza o meno di un polimorfismo.
La digestione dura 3 ore a 37°C e mettimo 5 ul di enzima piu' il suo relativo buffer (3 ul). (a questi parametri ci sono arrivata in seguito a numerose prove).
alla visione della digestione attraverso corsa elettroforetica si vedono i frammenti di degestione molto deboli.
come mai succede questo? cosa posso fare per aumentare l'intensità dei frammenti?

Gabriele
Utente

Prov.: Pisa
Città: Pisa


615 Messaggi
Inserito il - 07 agosto 2009 : 21:26:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gabriele Invia a Gabriele un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se il problema è una generale debolezza aumenta la quantità di DNA che digerisci, se invece sono deboli solo le bande del digerito, o aumenti l'enzima o aumenti il tempo di digestione.
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe."
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vesania
Nuovo Arrivato

bravo

Città: rovigo-ferrara-rovigo


98 Messaggi
Inserito il - 13 agosto 2009 : 12:39:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di vesania Invia a vesania un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
tutto questo l'ho già fatto e sono arrivata alle condizioni che ho detto sopra... continuo ad avere lo stesso problema
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Gabriele
Utente

Prov.: Pisa
Città: Pisa


615 Messaggi
Inserito il - 13 agosto 2009 : 20:02:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gabriele Invia a Gabriele un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non sono molti i fattori su cui si può intervenire in una digestione. Prova a cambiare lotto di enzima, magari quello che stai usando si è rovinato.
Metti meno DNA e ancora più enzima.
Auemnta ancora il tempo, 3 ore nn sono poi così tanto, nn ti fidare degli enzimi fast che promettono miracoli in 15'.
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe."
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