Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 28 aprile 2006 : 22:35:06
|
|
Sorvolando sulla struttura e sulle varie proprietà, sapete dirmi le differenze nei risultati che si ottengono dall'utilizzo di un microscopio confocale e di uno a fluorescenza, a parte naturalmente i piani focali, la capacità di osservare immagini tridimensionali?
|
 
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
|
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 29 aprile 2006 : 02:00:30
|
Beh le differenze sono: i piani focali e la capacita' di vedere immagini tridimensionali!
Diciamo che come potenza riesci ad ottenere la stessa cosa con i due tipi di microscopio, dipendentemente da che obiettivi/oculari ci monti ovviamente. Il confocale in generale e' piu' complesso da usare, quindi diciamo che non lo usi per un "quick look".
Ti faccio 2 esempi di cose che facciamo in lab in cui il confocale e' necessario:
- Noi usiamo delle fettine di cervello in cui iniettiamo in singoli neuroni un colorante a basso peso molecolare che quindi puo' permeare fino nei piu piccoli dendriti. Questo ti permette di "seguire" i dendriti del neurone partendo dal corpo cellulare. Poiche' pero' i dendriti possono andare su e giu' nella fettina, con il confocale puoi cambiare piano focale e seguirli, cosa che con il normale microscopio a fluorescenza non e' possibile fare.
- se vuoi colocalizzare due proteine puoi usare due antibodi con 2 diversi fluorofori. Pero' se non usi il confocale non puoi mai essere sicuro che la fluorescenza sia sovrapposta, perche' le proteine potrebbero stare su due piani completamente diversi. |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
 |
|
|
Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 29 aprile 2006 : 10:40:04
|
Ok, ti ringrazio!
Per caso sapresti anche dirmi qualche differenza tra i due per la valutazione del rapporto membrana-citoplasma o qualcosa del genere?
So che non è ben chiara la domanda, ma purtroppo non l'ho capita neanche io... |
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 29 aprile 2006 : 12:29:45
|
Credo la domanda sia capire se una proteina e' in membrana o nel citoplasma... ma non sono sicuro...
Ad ogni modo, immagina di fare un'immunocitochimica o immunoistochimica per determinare se una certa proteina e' localizzata in membrana. Prendi le tue cellule/fettina di tessuto e usi un anticorpo fluorescente contro la tua proteina.
Ora, se la tua proteina e' in membrana e usi un normale microscopio a fluorescenza vedrai la fluorescenza su tutta la cellula perche' la membrana ricopre tutta la cellula...
Con il confocale, invece, puoi guardare solo un piano focale e quindi vedrai un "cerchio" fluorescente (cioe' la membrana) e tutto il nero in mezzo (citoplasma).
PS: rileggendo la mia risposta di prima vorrei fare una piccola correzione...
col confocale non vedi le immagini in 3D, ma puoi ricostruire un'immagine 3D dalle immagini ottenute facendo uno scan successivo di diversi piani focali. |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
|
Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 29 aprile 2006 : 16:15:14
|
Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Credo la domanda sia capire se una proteina e' in membrana o nel citoplasma... ma non sono sicuro...
Ad ogni modo, immagina di fare un'immunocitochimica o immunoistochimica per determinare se una certa proteina e' localizzata in membrana. Prendi le tue cellule/fettina di tessuto e usi un anticorpo fluorescente contro la tua proteina.
Ora, se la tua proteina e' in membrana e usi un normale microscopio a fluorescenza vedrai la fluorescenza su tutta la cellula perche' la membrana ricopre tutta la cellula...
Con il confocale, invece, puoi guardare solo un piano focale e quindi vedrai un "cerchio" fluorescente (cioe' la membrana) e tutto il nero in mezzo (citoplasma).
Mi sembra un'ottima deduzione! Grazie ancora! |
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
Microscopio confocale e a fluorescenza
Didattica e Relazioni
