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Discussione |
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simoconfocale
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
 Inserito il - 01 settembre 2009 : 14:18:41
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Ciao,
è possibile identificare una proteina utilizzando solo anticorpi secondari con una sonda coniugata fluorescente oppure è necessario il metodo indiretto che prevede l'utilizzo anche di anticorpi primari???
grazie!!!!
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 01 settembre 2009 : 14:34:08
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perchè "metodo indiretto"? semmai esistono ab primari legati ad una sonda fluorescente, così non usi il secondario, ma come faresti altrimenti a far legare il secondario alla proteina che vuoi vedere??? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 01 settembre 2009 : 16:27:09
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Infatti! Se stai usando un anticorpo secondario, vuol dire che stai usando anche un primario!
Altrimenti hai solo il primario come dice iside |
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simoconfocale
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 02 settembre 2009 : 09:39:56
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grazie per le risposte!!! sono pienamente d'accordo ed infatti mi meravigliavo che, in un articolo da me letto, si parlasse solo di utilizzo di antic secondari!!!probabilmente me lo devo rileggere attentamente!!!
grazie ancora!!!! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 02 settembre 2009 : 09:47:31
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| A volte si utilizza solo il secondario come controllo negativo. Ovviamente non devi avere marcatura se non usi il primario |
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simoconfocale
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 02 settembre 2009 : 10:14:24
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ma se utilizzo una sonda molecolare specifica marcata con fitch (ad esempio)il processo è sempre legato all'uso di anticorpi o la sonda la posso utilizzare da sola?
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 02 settembre 2009 : 14:46:37
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ma di cosa stai parlando? facciamo degli esempi: se vuoi vedere una proteina e hai a disposizione un Ab legato ad una sonda allora non avrai bisogno di usare un secondario, come dicevamo prima. in altri casi invece il fluoroforo lo puoi tenere legato ad altri tipi di molecole, per esempio, se vuoi marcare l'actina puoi usare la phalloidin (che evidentemente non è un ab) legata alla sonda fluorescente. tutto dipende da cosa devi marcare e soprattutto da quello che hai a disposizione. in generale la marcatura più comune è con primario + secondario.  |
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simoconfocale
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 02 settembre 2009 : 15:10:38
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ok..allora sai mica consigliarmi quale molecola legare alla sonda per marcare la chitina?
il mio problema è quali ab primari cercare per questa proteina?
purtroppo ho a disposizione solo dei secondari e la sonda molecolare specifica per la proteina....beh grazie mi siete di grande aiuto!!!!!!!!!! |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 02 settembre 2009 : 15:29:04
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Citazione:
Messaggio inserito da simoconfocale
il mio problema è quali ab primari cercare per questa proteina?
leggendo questa frase mi pare di capire che hai un po' di confusione in testa. allora, quali sono i passaggi per marcare una proteina avendo a disposizione un ab primario? prova a elencarli e vediamo se è chiaro.
Citazione:
Messaggio inserito da simoconfocale
purtroppo ho a disposizione solo dei secondari e la sonda molecolare specifica per la proteina....
cioè??? che sonda hai?
Citazione:
Messaggio inserito da simoconfocale
ok..allora sai mica consigliarmi quale molecola legare alla sonda per marcare la chitina?[/quote]
puoi usare vari fluorofori, dal TRITC ad FITC, dipende da quale hai a disposizione. esistono kit commerciali che servono a fare proprio questo. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 02 settembre 2009 : 18:01:26
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Il problema credo sia che la chitina non è una proteina...
Prova a leggere qui
A quanto pare puoi usare wheat-germ lectin per marcarla |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 03 settembre 2009 : 09:48:22
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Il problema credo sia che la chitina non è una proteina...
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immunoistochimica
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