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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
 Inserito il - 09 maggio 2006 : 14:22:34
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Secondo la VOSTRA esperienza dove è meglio conservare il c-DNA? A+4° o a -20° (per tempi superiori ai 7 giorni)?
Io normalmente metto sempre tutto a - 20°a fine seduta, anche se devo fare dosaggi il giorno dopo con altri primers e con gli stessi campioni ( con concentrazioni che vanno da 40ng/ul a 2-5 ng/ul); mi sono accorta però che gli standard (sono sempre miei campioni) a diluizioni spinte al di sotto dell'1ng/ul e messe a -20°,non hanno la stessa efficienza se utilizzati in real time, anche solo dopo qualche giorno, per cui ho dedotto che non va bene e ad ogni seduta li ripreparo freschi. Che sia il congelamento e lo scongelamento per basse concentrazioni a determinare qualcosa?
Per contro delle mie colleghe hanno utilizzato del c-DNA conservato a +4° concentrato 40ng/ul dopo due mesi e pare fosse OK, (si sono da quella madre preparate le diluizioni fresche per la seduta di lavoro) nel senso che facendo due real identiche a distanza di tempo i valori erano sovrapponibili.
Io comunque non riesco a lasciare il c-DNA in frigo, è più forte di me, non ci riesco proprio.
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biomolecola
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
40 Messaggi |
 Inserito il - 09 maggio 2006 : 14:27:25
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| ...io lo conservo a -20°C...mi pare che nel mio istituto nessuno li conservi a 4°C!!! |
W la ricerca |
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fpotpot
Utente
Città: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 09 maggio 2006 : 22:45:29
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io li ho sempre conservati a -20 l'anno scorso per tutti 5 frammenti di cDNA di varia lunghezza,ma in effetti è stato necessario rifare la retrotrascrizione per uno o due di questi qualche volta,mi sa che anche se è dna è deboluccio perchè è un filamento...bisogna aver un pò più di cura...che palle eh? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 09 maggio 2006 : 23:16:22
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cDNA solitamente a -20, a 4 gradi se lo devo usare a breve.
Il DNA invece a 4 gradi e' piu' che stabile. Inoltre la stabilita' aumenta se lo risospendi in TE rispetto all'acqua. |
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Cangrande
Utente Junior
Prov.: Verona
280 Messaggi |
Inserito il - 16 maggio 2006 : 18:29:26
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Dipende!!!In cosa lo risospendi?
Io di solito metto
+4°C se risospeso in trisHCl+edta
-20°C se risospeso in acqua
in teoria la temperatura dovrebbe bloccare le DNasi che nell'altra soluzionesono bloccate dal chelante di ioni bivalenti. |
Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala. |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 17 maggio 2006 : 14:38:20
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| Risospendo in H2O |
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fpotpot
Utente
Città: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 17 maggio 2006 : 15:29:08
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| secondo me allora -20,anch'io risospendevo in h20.. |
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Cangrande
Utente Junior
Prov.: Verona
280 Messaggi |
Inserito il - 17 maggio 2006 : 16:52:35
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| -20C cosi le DNasi non agiscono |
Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala. |
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conservazione c-DNA
Didattica e Relazioni
