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Discussione

eria
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 22 settembre 2009 : 19:41:28

avrei bisogno di alcune informazioni per valutare un p� i protocolli che devo mettere a punto...
in generale, da 30mg di tessuto, molto orientativamente, che concentrazione di rna totale di pu� estrarre?l'eventuale diluizione, si effettua in semplice acqua milliQ?
grazie mille a chi potr� aiutarmi!

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 22 settembre 2009 : 19:53:54

Dipende dal tessuto, sul sito della Qiagen c'� una tabella, se non la trovi la cerco e te la posto!

Intendi la diluizione dell'RNA? Deve essere fatta in acqua RNasi-free, non basta che sia milliQ.

eria
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 23 settembre 2009 : 12:44:09

no, in effetti non la trovo, mi faresti davvero un favore.
altra domandina: quando poi si usa per ottenere cDNA, pi� o meno, che concentrazioni di prodotto si ottengono?

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 23 settembre 2009 : 19:01:23

Una tabella la trovi qui: RNeasy
sinceramente me ne ricordavo una pi� dettagliata...
Comunque sul sito della Ambion trovi questa: RNA conversions
che � sicuramente pi� indicativa.

Citazione:
altra domandina: quando poi si usa per ottenere cDNA, pi� o meno, che concentrazioni di prodotto si ottengono?

a questa domanda � in realt� un po' difficile rispondere. Innanzitutto dipende da come retrotrascrivi: ologodT, random primers, primers specicifi. Poi tieni conto che non � una amplificazione, quindi "in teoria" da una molecola di RNA ottieni una molecola di cDNA. Ma tutto dipende dal metodo che utilizzi per retrotrascrivere, dalle quantit� di reagenti utilizzati e dall'efficienza dell'enzima.