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Army
Nuovo Arrivato

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Città: napoli


30 Messaggi

Inserito il - 13 ottobre 2009 : 10:32:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Army  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Army Invia a Army un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve vorrei un aiuto per quanto riguarda estrazione di RNA. Io avevo alcuni campioni conservati in trizol a -80 e per facilitarmi l'estrazione ho utilizzato delle eppendorff con il gel che mi separano bene le due fasi ma essendo passato ora ad utilizzare campioni conservati non più in 500ul ma in 1ml di trizol il gel sembra nn riuscire a separe le due fasi e si mischia tutto. a questo punto ho trovato in lab il kit RNeasy della quiagen ma nn so se posso usarlo con campioni conservati in trizol qualcuno sa dirmi che fare?????
Grazie mille

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 13 ottobre 2009 : 11:48:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
No non puoi mischiarli sono due metodi di estrazione diversi (il trizol contiene fenolo), dovresti procedere ad una normale estrazione con cloroformio e poi puoi utilizzare il kit RNeasy per purificare ulteriormente il tuo RNA.
Ci sono varie metodiche, ad es. questa: Total RNA Extraction with TRIZOL Reagent and Purification with QIAGEN RNeasy Mini Kit

Oppure se vuoi utilizzare il tuo gel (non l'ho mai provato), potresti suddividere in 2 il tuo ml e riunirlo alla fine.
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Army
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
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30 Messaggi

Inserito il - 13 ottobre 2009 : 12:44:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Army  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Army Invia a Army un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille ora do uno sguardo e ti faccio sapere.
Grazie
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Army
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Città: napoli


30 Messaggi

Inserito il - 13 ottobre 2009 : 13:33:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Army  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Army Invia a Army un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve ho appena finito di fare l'estrazione di RNA con TRIZOL della roche e inaspettatemente il mio pellet dopo la precipitazione è uscito rosa a differenza delle altre volte che ho utilizzato campioni conservati in TRIZOL invitrogen dove il pellet era trasparente o bianco sapreste darmi un aiuto?!?!?
Un altra cosa che ho cambiato è stato il cloroformio nel senso che questa volta ho usato cloroformio isoamilico e non solo cloroformio come le altre volte.
Attendo una vostra risposta.....
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