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Uptake
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 Inserito il - 27 ottobre 2009 : 11:13:46
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Buongiorno a tutti...
in questo momento dovrei valutare in RealTime l'espressione di alcuni geni, avrei alcune cose da chiedere:
-in primis quale concentrazione usare di cDNA per reazione;
-secondo, se la retrotrascrizione RNA-cDNA segue il rapporto 1:1 ;
-infine ho retrotrascritto il mio RNA, ma ho commesso un errore, invece di usare l'opportuna diluizione di RNA(con concentrazione finale di 1 microgrammo)ho usato (con il kit Qiagen Quantitec Reverse Transcription) la madre concentrata, quindi ho usato più o meno 5 microgrammi...secondo voi:
ha retrotrascritto correttamente (ovviamente non mi aspetto un'efficienza del 100%) oppure, visto l'ingombro sterico dovuto all'eccessiva concentrazione non ho retrotrascritto niente e si è tutto degradato?
Fatemi sapere...grazie
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