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Autore

Discussione

GFAP
Nuovo Arrivato

18 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2009 : 18:19:05

Salve a tutti,
ho un problema con il lysis buffer per western blot.
Qualcuno sa consigliarmi un lysis completo per avere l'estrazione totale (nucleo e citoplasma) anche di proteine fosforilate?

Grazie

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2009 : 18:36:42

Uno di questi due

http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=10
http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=11

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GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2009 : 18:55:43

e sopratutto se hai bisogno delle proteine fosforilate aggiungi anche gli inibitori delle fosfatasi!

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2009 : 19:57:59

(ci sono già in quei protocolli

)

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GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2009 : 22:23:08

Citazione:
Messaggio inserito da chick80

(ci sono già in quei protocolli )

ah ok hai ragione!

Nel Cocktail di inibitori delle proteasi indicato nei protocolli in effetti sono presenti Sodio Ortovanadato e Sodio Fluoruro che sono inibitori delle fosfatasi. Però spesso si tende ad usare cocktail già pronti che non sempre contengono anche inibitori delle fosfatasi e inoltre esistono anche cocktail di inibitori delle fosfatasi che sono più efficaci. (ad es. è presente anche beta-glicerofosfato che a quanto ne so è un inibitore più potente rispetto a NaVO3 e NaF).
Insomma, in ogni caso assicurati di avere gli inibitori delle fosfatasi nel tuo buffer.