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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 28 maggio 2006 : 22:48:40
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Ciao a tutti.
Mi chiedevo se qualcuno avesse mai usato l'Optiprep (che dal sito della Sigma vedo essere iodixanolo) per separare diversi tipi cellulari prima di metterli in coltura.
Inoltre qualcuno mi sa suggerire qualche altra cosa meno costosa (mi rompe spendere 350$ per una bottiglietta da 250 ml...  )
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marcocatucci
Nuovo Arrivato
Prov.: Estero
Città: Leeds, England
19 Messaggi |
Inserito il - 29 maggio 2006 : 23:06:08
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Ho un protocollo (pubblicato su "laboratory investigation")
per la separazione di cellule epiteliali
a partire da biopsie di mucosa intestinale.
In linea generale il protocollo prevede solo dei lavaggi in EDTA.
Personalmente non ho mai fatto separazione di cellule da tessuto,
però non mio lab c'è chi l'ha fatta da tessuti di topo.
Se mi dici più precisamente cosa devi fare,
posso provare ad aiutarti.
Questo è l'articolo che ti dicevo:
Rogler G, el al. "Establishment of long-term primary cultures of human small and large intestinal epithelial cells."
Lab Invest. 1998 Jul;78(7):889-90. |
Marco
W la Ricerca! |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 30 maggio 2006 : 00:44:02
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Non ho mai sentito prima l'Optiprep, ma da quanto vedo dal sito della Sigma sembra semplicemente un gradiente e a quanto dice l'abstract è utili per separare gli organelli cellulari.
Le mie colleghe per separare la cellule usano gradienti di Percoll, anche questo lo trovi alla Sigma, con prezzi più contenuti (ce ne sono diversi tipi)
Ciao |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 30 maggio 2006 : 05:49:35
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Dunque, quello che sto facendo sono colture primarie di neuroni adulti.
Ho visto che in un paio di protocolli usano un gradiente di questo Optiprep per separare innanzitutto le cellule dai detriti cellulari (cosa che mi farebbe comodo) e poi i neuroni dalla glia (cosa non strettamente necessaria per i miei esperimenti, ma sarebbe bello...).
Che dite, con il Percoll potrebbe funzionare? Non dovrebbe danneggiare le cellule vero? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 30 maggio 2006 : 09:34:13
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Citazione:
Che dite, con il Percoll potrebbe funzionare? Non dovrebbe danneggiare le cellule vero?
Di sicuro le cellule non si rovinano!!! E per funzionare penso che funzioni, nel mio laboratorio lo usano per isolare i linfociti e non so se lo hanno usato anche per altro... dovrei controllare i protocolli che abbiamo, noi studiamo il rene e probabilmente lo hanno usato anche per separare cellule tubolari da podociti.
Prover#242; a sentire un'amica che lavora sui neuroni, appena la rintraccio (non #232; facile!) ti faccio sapere.
Per ora posso solo dirti di guardare i data sheets del percoll della sigma allegati e magari di leggerti questo articolo che citano per la separazione dei neuroni in percoll:
Soldenberg, S.S., and De Boni, U., J. Neurobiol., 14, 195-206 (1983).
Allegato:  p1644pis.pdf
62,55 KB
Allegato: 77237_data_sheet_184kb.pdf
187,68 KB |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 30 maggio 2006 : 09:50:31
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Scusa mi sono accorta che la citazione dell'articolo che ho copiato dal data sheet è sbagliata, quella corretta è questa:
Pure population of viable neurons from rabbit dorsal root ganglia, using gradients of percoll
Journal of Neurobiology
Volume 14, Issue 3, Date: May 1983, Pages: 195-206
S. S. S. Goldenberg, U. De Boni |
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Optiprep
Didattica e Relazioni
