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sarmirna
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
 Inserito il - 22 novembre 2009 : 17:37:36
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Ragazzi vorrei avere da voi un consiglio. Da poco lavoro con linee cellulari, nello specifico con le Hela. Nel mio lab prima di splittarle e dopo aver tripsinizzato le cellule, mi fanno fare uno step aggiuntivo: le prendo, le risospendo in terreno completo in un tubo da 15 ml e le centrifugo per 10 minuti. dopodichè le risospendo e le splitto. questo perchè, mi dicono , riesco a eliminare tutta la tripsina aggiunta ( che dalle mie conoscenze, viene comunque disattivata con l'aggiunta del terreno). Voi cosa ne pensate??? Stresso eccessivamente le cellule con questo step aggiuntivo?? please let me know.
Sarmirna
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6942 Messaggi |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 22 novembre 2009 : 19:01:47
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Anche secondo me se puoi evitare è meglio, perchè i terreni
completi contengono inibitori della tripsina provenienti dal siero.
Se invece non usi terreni completi di siero, il discorso cambia. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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sarmirna
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 22 novembre 2009 : 19:39:28
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Uso terreni completi.
il mio collega ritiene che cantrifugare permette l'eliminazione di ogni minimo residuo che potrebbe inibire la nuova adesione cellulare. ma a me sta cosa nn mi ha mai convinto...metto meno tripsina e nn centrifugo piu ...deciso!!!!!! |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 22 novembre 2009 : 19:54:02
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dieci volumi di completo inibiscono ogni minimo residuo di tripsina,
ma in realtà quasi tutti quelli che conosco ne usano molto meno |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
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Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6942 Messaggi |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2009 : 12:40:22
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Anche io centrifugo le HeLa per eliminare la tripsina, e non ho mai osservato cellule sofferenti dopo la centrifugazione. logicamente, non puoi mandare la centrifuga per troppo tempo, 2 minuti a 2000rpm sono più che sufficienti.
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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