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Discussione

amelietta
Nuovo Arrivato

21 Messaggi

Inserito il - 25 novembre 2009 : 19:09:07

ciao a tutti, ho un dubbio di estrazione. Devo estarre RNA da tessuto conservato in RNAlater. ho letto che, se faccio il passaggio in TRIAZOL e cloroformio, dal momento che le molecole di RNA saranno nella porzione superiore del tubino, se prelevo con attenzione solo quella parte posso poi evitare di fare il trattamento con le dnasi. Vorrei evitarlo se possibile perch� un collega mi ha detto che con quel trattamento si elimana bene il DNA ma si riduce notevolmete la resa dell'RNA. Che mi consigliate?
grazie grazie
ciao a tutti

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 25 novembre 2009 : 22:57:03

Beh � vero che l'RNA � nella fase superiore e il DNA nell'interfase, ma non � garantito al 100% che sia tutto RNA DNA-free.
Se vuoi essere sicura di eliminare tutto il DNA devi comunque fare il trattamento con DNasi.
Comunque dipende anche da in cosa consiste il tuo esperimento, ad es. se devi fare una PCR e hai disegnato primer che amplificano solo cDNA e non DNA genomico non � necessario fare il trattamento con DNasi.

amelietta
Nuovo Arrivato

21 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2009 : 14:59:35

grazie e scusa se ti rispondo solo ora! io avrò primer specifici per cDNA e non per genomico quindi spero di non avere problemi!
ciao