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Gabry
Nuovo Arrivato
Prov.: Ancona
Città: santa maria nuova
64 Messaggi |
 Inserito il - 01 dicembre 2009 : 17:30:04
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ciao a tutti,
sto studiando l'andamento della trascrizione delle sequenze Alu.
il mio intento è quello di studiare l'espressione relativa delle Alu in culture cellulari sottoposte a vari tipi di stress (heat shock, cicloesimmide, stress chimici e fisici).
Il metodo di determinazione, come potrete immaginare, è tramite Real time (Biorad, se può interessare).
l'estrazione dell' RNA del campione viene fatta con un kit della qiagen e la rt idem. In aggiunta c'è un passaggio con DNAwipeout per eliminare tutto il DNA gnomico (che crea molti aspecifici per le Alu).
i primer sono specifici per il cDNA. Quindi fin qui tutto nella norma.
la real time viene discretamente ma il problema sta nella curva di melting. quando eseguo la curva di melting non vedo un unico picco predominante ma una serie di picchi e l'andamento globale della curva è crescente.
Immagine:
65,93 KB
ora vi chiedo se sapete darmi delle notizie in più sul perchè le alu si comportano in questo modo e se qualcuno di voi conosce un modo efficace per migliorare il risultato.
le sto pensando tutte ma non riesco a trovare una via d'uscita.
grazie in anticipo per l'aiuto.
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trascrizione Alu
Didattica
