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roselady
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
119 Messaggi |
 Inserito il - 09 dicembre 2009 : 19:25:51
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Ciao a tutti ! in laboratorio ho tentato di fare un saggio enzimatico,variando la concentrazione di substrato.
La concentrazione di enzima utilizzata è pari a 0,1 mg/ml .
Ho misurato allo spettrofotometro il valore di assorbanza,uguale a 0.013.A questo punto,mediante la legge di lambert e beer che dice che A= epsilon x c x l mi calcolo la concentrazione che è uguale a A/epsilon x l ( dove epsilon=9.34 e l=1 )
Mi trovo che c= 1.39 x 10^-3 ( 10 alla meno 3 ) .
A questo punto sorge il mio problema:
devo calcolare l'attività specifica,uguale a U/ mg .
La professoressa del laboratorio ha detto che la'ttività specifica è uguale a c x 1000 / 1 microgrammo .
Non riesco a capire da dove venga quell' 1 microgrammo .
Tra i calcoli c'è scritto : 0,1 microgrammo/microlitro ( che penso sia uguale a o,1 mg/ml ,cioè l'enzima usato) moltiplicato per 10 microlitri =1 microgrammo.
Scrivo la formula per far capire meglio : 0,1 microgr./microlit. x 10 microlitri= 1 microgrammo.
Come e perchè si moltiplica per 10 microlitri?
Aggiungo tra i dati che si deve raggiungere un volume finale pari a 1 mL nella cuvetta per la miscela di reazione per il saggio di attività standard .
Mi scuso per essermi dilungata troppo ma non so proprio dove mettere mano..spero che qualkuno mi possa aiutare :( grazie mille! per facilitare la comprensione allego il testo dell'esercizio:
La reazione viene seguita in continuo in uno spettrofotometro,alla fine si calcola la differenza di assorbimento al minuto ( delta OD /min) .Per la legge di lambert beer si determina la quantità in micromoli si 4 nitrofenolo( sarebbe il prodotto) prodotto nell'unità di tempo,definendo kosi le unità enzimatiche rilevate. Considerando la quantità in microgrammi di enzima,si ottiene di conseguenza l'attività specifica dell'enzima espressa in U/mg.
Ho gia fatto questa domanda ma nessuno mi ha risposto,forse non era la sezione giusta..spero che qualcuno di voi possa aiutarmi..glassie!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 09 dicembre 2009 : 21:03:30
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Scusa roselady, ma postare la stessa discussione più volte è contro il regolamento del forum, perché genera solo confusione:
Citazione:
da Regolamento
9) Non duplicare i messaggi, nè all'interno dello stesso forum, nè scrivendo lo stesso messaggio su più forum (cross-posting), perchè ciò rende molto difficile seguire una conversazione se piu persone rispondono allo stesso messaggio in diversi forum.
Se si è indecisi in quale sezione scrivere la propria domanda sceglierne una che sembri appropriata, i moderatori provvederanno a spostarla in caso lo ritengano necessario.
Tutti i messaggi doppi verranno cancellati.
e come detto nel regolamento se pensi che la sezione non sia appropriata avverti un moderatore.
Questa domanda io ad esempio la vedrei meglio in Biochimica, quindi chiudo questa discussione doppia e ti sposto l'altra in Biochimica.
Comunque non è detto che tu riceva subito una risposta, a volte bisogna solo essere pazienti e aspettare che qualcuno risponda.
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