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picachou
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 17 dicembre 2009 : 00:03:51

scusate , probabilmente � una domanda gi� fatta e a cui � gi� stata data risposta, per� non ho capito; devo fare una real time quantitativa relativa, utilizzo come housekeeping il GAPDH e faccio una simplex poich� in duplex mi sono accorta di avere problemi di competizione tra il mio gene target ed il gene HK.
Per ogni campione ottengo un valore di Ct per il gene target ed un valore di Ct per HK e calcolo il risultato facendo [Ct HK-Ct target].
Fin qui, tutto ok, ma mi dicono che sarebbe meglio normalizzare i risultati con un pool di RNA ottenuto da soggetti non trattati, cosa significa? cosa devo fare?

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 17 dicembre 2009 : 01:44:04

Si se cerchi un po' nel forum ci sono un sacco di discussioni in proposito (intanto la tua la sposto nella sezione di Biologia Molecolare), comunque detto in due parole devi avere un "controllo" ad es. campioni non trattati e questo lo poni pari a 1, e tutti gli altri valori li dividi per il DDct del controllo, in questo modo vedi se l'espressione del tuo gene nei tuoi campioni in esame (trattati) aumenta o diminuisce.

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 17 dicembre 2009 : 08:26:34

tipo quello che si diceva qui:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1423

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