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domi84
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Città: Glasgow
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 Inserito il - 05 giugno 2006 : 18:02:06
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Allora:
nella messa a punto di un protocollo di pcr bisogna conoscere almeno parzialmente la sequenza genica da amplificare?
sì, devi almeno conoscere le seq dai quali farai i primers, o in alcuni tipi di PCR basta conoscere la seq per fare anche un solo primer.
la scelta dei primers deve essere con sequenza interamente complementare allo stampo?
Decisamente si, anche se è possibile che riescano a "sopportare" dei mismatch al 5', al 3' il primer deve essere assolutamente complementare alla seq altrimenti la pol non riconosce il ds.
la real time pcr è un metodo cinetico per misurare la qualità iniziale di acido nucleico presente in un campione?
Non la qualità, ma la quantità. Mi pare che più che la quantità vera e propria (in microgrammi x es.) funzioni meglio x fare confronti di quantità fra due campioni (x es. nel campione A il Dna è il doppio del campione B)
prevede sempre l'uso di sonde oligonucleotidiche fluorescenti?
sì! altrimenti come fai a rilevarne la sintesi?!tieni conto che esistono diversi tipi di sonde a fluorescenza, che usano diversi meccanismi. |
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