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bioda
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7 Messaggi

Inserito il - 18 dicembre 2009 : 11:31:47

Ciao a tutti voi,

mi trovo daventi ad un impresa per niente facile e spero che questo possiate aiutarmi.
Nell'ambito della targeted therapy per i tumori cerebrali mi trovo a utilizzare un modello animale di Glioblastoma in cui ho la possibilit� di iniettare I.V. anticorpi monoclonali specifici per antigeni espressi dalle cellule tumorali.

Prima di tutto ho bisogno di dimostrare che questo anticorpo si accumula nella massa tumorale e secondo che non si lega aspecificamente ad altri tessuti dell'animale.

Per quanto mi riguarda ho gi� usato IHC o IF (usando solo l'ab 2�) ma non sono soddsfatto al massimo, quindi ho anche pensato di congelare in N2 un po' di tessuto (sia la massa tumorale che gli alrti organi della povera bestiola) per poter fare un estratto proteico e successivamente un IP o un WB con un ANTI-mouse (il mio Ab 1� � prodotto in Mouse).

Alcuni dubbi sulla IF.
Prima di includere la massa tumorale in TEK fisso alla PFA 4% per 30'. Pensate che debba successivamente fissare anche la fettina sul vetrino? Se si, cosa utilizzare?
Quando ho fatto la prima IF, avevo utilizzato MetOH/Ac 80%/20% ma leggo adesso che non � il massimo per gli antigeni di membrana. (il mio Ab lega una proteina di membrana o extracellualre)
Se avete suggerimenti sono ben accetti.

Se avete anche altri suggerimenti per andare alla ricerca del mio anticorpo...non esitate a scrivere.

Buone feste a tutti.
Davide