| Autore |
Discussione |
|
|
Federicax1989
Utente Junior
316 Messaggi |
 Inserito il - 20 gennaio 2010 : 13:38:10
|
CIAO,ho usato lo spettrofotometro per trovare l'assorbanza di soluzioni di BSA mescolata al reattivo Blu Comassie.Ma prima di mettere le cuvette contenenti quelle soluzioni ,azzeravo ,poi mettevo la cuvetta chiudevo e cosi' via..
quindi fare il bianco significa tararlo???
pero' non capisco perchè questo e' quello che ho fatto nella pratica,ma non riesco a collegare teoria e pratica.
DOMANDA SINTETICA xD: tarare significa azzerare contro il bianco?cioe' ponendo A=0 prima di inserire la cuvetta con H2O+COMASSIE+REATTIVO, lo spettrofotometro sottrae direttamente l'A di H2O+comassie "solo"(non legato alle proteine)??
Spiego meglio:
Il bianco e'il solvente giusto? ..quindi nel mio caso e' H2O+comassie???leggo l'assorbanza di questo e poi lo sottraggo all'assorbanza della soluzione di campione+H2O+comassie???
Ma io nella pratica non ho fatto cosi' !!!lo fa lo spettrofotometro direttamente?? ma come fa se io azzero ancor prima di mettere la soluzione..
|
|
|
|
|
chim2
Utente Attivo
2110 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 15:40:53
|
| ke lo sottrae direttamente non saprei ,probabile, dovresti controllare il programma...io pero so ke lo si fa direttamente dal grafico sperimentale..se ritrovo gli appuni ti faccio sapere meglio |
 |
|
|
mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato
116 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 15:41:24
|
mi sono un po perso leggendo lil tuo topic ma provo a rispondere lo stesso a parole mie.
Il bianco è il valore di assorbanza in cui (nel tuo caso) è presente tutto tranne la BSA. Questo perche anche il Comassie assorbe a 595 nm.
Quando poi prepari la cuvetta mettendoci anche la BSA, l'assorbanza sara data dalla somma del bianco e della BSA che ha reagito. Pertanto per sapere qual'è il vero valore della BSA devi sottrarre il valore di assorbanza che ti darebbe il comassie, cioè il bianco.
Spero di essermi spiegato.
Ciao |
|
|
|
Federicax1989
Utente Junior
316 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 16:55:35
|
Citazione:
Messaggio inserito da mattia.dinunzio
mi sono un po perso leggendo lil tuo topic ma provo a rispondere lo stesso a parole mie.
Il bianco è il valore di assorbanza in cui (nel tuo caso) è presente tutto tranne la BSA. Questo perche anche il Comassie assorbe a 595 nm.
Quando poi prepari la cuvetta mettendoci anche la BSA, l'assorbanza sara data dalla somma del bianco e della BSA che ha reagito. Pertanto per sapere qual'è il vero valore della BSA devi sottrarre il valore di assorbanza che ti darebbe il comassie, cioè il bianco.
Spero di essermi spiegato.
Ciao
si si intendevo questo..ma perchè allora si dice che l'assorbanza del bianco vale 0???allora cosa sottraggo nulla? |
|
|
|
Federicax1989
Utente Junior
316 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 16:58:23
|
Citazione:
Messaggio inserito da chim2
ke lo sottrae direttamente non saprei ,probabile, dovresti controllare il programma...io pero so ke lo si fa direttamente dal grafico sperimentale..se ritrovo gli appuni ti faccio sapere meglio
si perchè io quando ho scritto l'assorbanza della BSA non ho sottratto niente.Inoltre nella tabella prima delle varie assorbanze di BSA c'e' il valore di assorbanza del bianco che vale 0.00.Per questo non capisco xk poi si dice che si deve sottrarre il bianco,quando poi vale 0. |
|
|
|
chim2
Utente Attivo
2110 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 17:32:09
|
infatti il segnale del bianco non è detto ke vale zero!!se pero non vale zero devi sottrarre tutti i dati prima di tarare o interpolare con altri metodi..cmq dipende dalla funzione ke ottieni.in spettrofotometria cmq è meglio azzerare il risultato usando un bianco reagente (soluzione aquosa ke contiene tutti i reagenti tranne la soluzione standard di analita), cosi elimini dal segnale la componente dovuta a tutti i reagenti usati.Cmq all' assorbanza del campione si sottrae sia l' assorbanza del bianco reagente e sia quella del bianco campione (poi per esempio lo puoi determinare mediante l' equazione della retta)...l' azzeramento dello strumento di solito viene fatto con acqua distillata  |
|
|
|
M111
Utente
Prov.: Lucca
Città: Guamo
838 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 17:42:25
|
| Io non capisco...il bianco non può esser 0... |
|
|
|
chim2
Utente Attivo
2110 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 17:47:28
|
| no..ma come punto sperimentale è (0,0) da inserire nel grafico |
|
|
|
M111
Utente
Prov.: Lucca
Città: Guamo
838 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 17:50:56
|
....non ho seguito bene tutto l'evolversi.....c'è na faccina per tirarsi na manata in fronte? |
|
|
|
chim2
Utente Attivo
2110 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 17:57:45
|
in ke senso....... |
|
|
|
M111
Utente
Prov.: Lucca
Città: Guamo
838 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 18:03:11
|
Pensavo ai tabulati...
Ovvio che in grafico il bianco non compaia :) |
|
|
|
chim2
Utente Attivo
2110 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 18:07:46
|
bisognerebbe avere il protocollo da seguire perke puo essere ke ci sia un bianco campione e un bianco reagente e le cose cambiano..non si puo parlare di bianco in generale...cmq di solito basta azzerare con acqua distillata  |
|
|
|
M111
Utente
Prov.: Lucca
Città: Guamo
838 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 18:14:32
|
BSA e Coomassie blue io li associo mentalmente al Bradford...sei o sette misure fatte in doppio compreso bianco, la cosa è lineare per definizione.....
Poi se si tratta di altra roba le cose cambiano. |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 18:43:59
|
| Il bianco lo sottrai a tutti, anche a lui stesso, quindi viene per forza 0 (nel grafico metti i valori già sottratti) |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
|
Federicax1989
Utente Junior
316 Messaggi |
Inserito il - 23 gennaio 2010 : 11:32:51
|
Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Il bianco lo sottrai a tutti, anche a lui stesso, quindi viene per forza 0 (nel grafico metti i valori già sottratti)
ah ecco.Percio' viene O il primo punto.Mi sembrava strano. |
|
|
| |
Discussione |
|
azzeramento contro il bianco
Didattica e Relazioni
