Elettroforesi su gel di poliacrilammide

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Elettroforesi su gel di poliacrilammide

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Barbaryna
Nuovo Arrivato

47 Messaggi

Inserito il - 28 gennaio 2010 : 17:56:17

Ciao a tutti!!l'elettroforesi su gel di poliacrilammide so che si usa per le proteine ma riguardo la metodica sto un po in confusione....potreste spiegarmela??!!grazie!!!

Lordlore
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 30 gennaio 2010 : 19:33:58

stavi parlando del western blotting...
http://it.wikipedia.org/wiki/Western_blot

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 31 gennaio 2010 : 00:59:58

L'elettroforesi su gel di acrilamide � solo una parte del Western Blot.
Si possono far migrare le proteine mediante PAGE (PolyAcrylamide Gel Electrophoresis, sia in condizioni denaturanti (SDS) che native, anche senza eseguire poi un Western Blot, si pu� ad esempio colorare il gel dopo elettroforesi. Oppure di pu� eseguire anche una 2D (elettroforesi bidimensionale).

Comunque il link di Wikipedia in Italiano � un po' riduttivo oltre a riportare un grosso errore: il western blot non � l'immunofissazione!
Ti consiglio di guardarti la versione in inglese: http://en.wikipedia.org/wiki/Western_blot
o almeno quella da WikiBooks (in Italiano) che � un po' meglio: http://it.wikibooks.org/wiki/Laboratorio/Western_blot
qua invece trovi una cosa molto schematica: http://www.bio.davidson.edu/COURSES/genomics/method/Westernblot.html
e anche una spiegazione della SDS-PAGE: http://www.bio.davidson.edu/COURSES/genomics/method/SDSPAGE/SDSPAGE.html

LorenZ
Nuovo Arrivato

95 Messaggi

Inserito il - 31 gennaio 2010 : 17:57:12

Sfruttando questo post volevo fare due domande riguardo il gel d'agarosio e di policrilammide.
So che la Souther ne la Northen vengono fatte con gel d'agarosio e che variandone la concentrazione si pu� rendere il gel capace di trattenere pi� o meno molecole di dna o rna.
1)La prima domanda �... ma al posto del gel d'agarosio posso usare quello di policril ammide per la Southern e Northen ?

2)Da qualche parte avevo letto che il gel di Policrilammide ha maglie pi� strette rispetto all'agarosio, (naturalmente intendo alla stessa concentrazione ) e che per tale motivo � utilizzato per bloccare le proteine che sono pi� piccole del dna..... ed � quest'ultimo punto che non m'� chiaro....

( cio� le proteine sono pi� piccole del dna ? )

Scusate le domande sciocche ma spero che qualcuno possa darmi una mano

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 31 gennaio 2010 : 20:07:51

Citazione:
Messaggio inserito da LorenZ

1)La prima domanda �... ma al posto del gel d'agarosio posso usare quello di policril ammide per la Southern e Northen ?

Certo!

Citazione:
Messaggio inserito da LorenZ

2)Da qualche parte avevo letto che il gel di Policrilammide ha maglie pi� strette rispetto all'agarosio, (naturalmente intendo alla stessa concentrazione ) e che per tale motivo � utilizzato per bloccare le proteine che sono pi� piccole del dna..... ed � quest'ultimo punto che non m'� chiaro.... ( cio� le proteine sono pi� piccole del dna ? )

Hanno da poco fatto la stesa domanda qua: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=16451

Barbaryna
Nuovo Arrivato

47 Messaggi

Inserito il - 01 febbraio 2010 : 17:32:41

Grazie mille per le risposte!!!ora ho un'altra domanda...come � fatto lo strumento per fare l'elettroforesi su gel di polacr.?sul libro c'� scritto che � verticale, cio�??e la soluzione di poliacr.l'aggiungo liquida e poi si solidifica dentro lo strumento???aiuto!!!!il principio � semplice da capire ma sapere spiegare come si opera in pratica non avendolo mai fatto mi risulta difficile!!grazie mille!!!

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 01 febbraio 2010 : 17:43:16

Come quello per l'agarosio, solo che � verticale....

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GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 01 febbraio 2010 : 18:13:46

Il Gel lo fai preparando una soluzione liquida che contiene acrilamide, che dopo un po' solidifica.
Versi questa soluzione tra due vetri tra i quali c'� uno spaziatore. I vetri sono tenuti in verticale e appoggiati su un supporto in modo che la soluzione non esca.

Una volta che hai il tuo gel solidificato, sempre tenendolo tra i due vetri lo metti in un apparato per l'elettroforesi verticale, che � quello di cui ti ha messo l'immagine chick80.

Barbaryna
Nuovo Arrivato

47 Messaggi

Inserito il - 03 febbraio 2010 : 10:43:50

Grazie mille per le informazioni che mi avete dato e speriamo bene!!oggi ho l'esame!!!!!!!!!!!!!!!

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