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Discussione

caaterina
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 01 febbraio 2010 : 22:23:51

Ciao a tutti,
sono nuova del forum e vi scrivo per risolvere un problema: ho trasfettato le cellule di CHO e selezionato con puromicina 1 microgrammo/ml per� le cellule non sono morte neanche dopo molti giorni dalla trasfezione.
Qualcuno di voi ha mai trasfettato questo tipo di cellule?
Pu� essere che questa dose di puromicina � troppo bassa per selezionare i cloni?
Oppure questo tipo di cellule sono resistenti alla puromicina?
Aggiungo che ho fatto una prova sulle CHO non trasfettate e alla dose di 2 microgrammo/ml le cellule sono tutte sopravvissute.
Spero che qualcuno mi aiuti...

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 02 febbraio 2010 : 00:00:52

Beh non ho esperienza diretta, ma credo che la concentrazione che hai utilizzato sia troppo bassa.
La concentrazione della puromicina � diversa a secondo del tipo cellulare che utilizzi.
Qua ci sono un po' di info, anche se non ci sono le CHO: http://openwetware.org/wiki/Griffin:Puromycin_Selection
ma se cerchi un po' in giro e sopratutto in bibliografia vai a vedere che concentrazioni vengono utilizzate, ad es. facendo una ricerca veloce ho trovato questi:
http://labs.idi.harvard.edu/springer/protocols/jun_CHOlec.html
http://labclone.blogspot.com/2007/06/culture-and-stable-cloning-of-cho-cells.html
http://www.sciencemag.org/cgi/data/309/5731/127/DC1/1

utilizzano una concentrazione attorno a 10ug/ml quindi ben pi� concentrata rispetto a quella che hai utilizzato tu.
Prova a vedere questi e a cercare altro.

e... Benvenuta su Molecularlab!

caaterina
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 02 febbraio 2010 : 20:51:36

Grazie mille per la tua risposta.
In effetti credo che provero' una concentrazione di puromicina piu' alta sperando che non muoiano quelle trasfettate